Порядок отбора проб молока для постановки ИФА

При отборе проб молока необходимо учитывать физиологическое состояние животного, запрещается взятие образцов от коров в течение месяца после отела, менее 21 дня после введения животным вакцин и аллергенов, больных маститами, эндометритами. Молоко для объединенной пробы от каждой лактирующей коровы сдаивают в мерную емкость объемом не менее 15 мл с учетом следующих требований:

- 2-3 струи молока сдаивают, а последующими наполняют мерную емкость в объёме 15 мл.

- объединенную пробу (не более 100 проб) составляют непосредственно на ферме, путём смешивания проб молока от каждого животного (по 15 мл) в ёмкости 1л.

- после перемешивания объединенной пробы в стерильную пробирку (флакон) отбирают пробу молока в объёме не менее 20 мл, которую укупоривают , маркируют и доставляют в лабораторию.

- индивидуальные и объединённые пробы молока исследуют в свежем виде, допускается их однократное замораживание, консервирование консервантом «Бромопол» Прокисшее молоко не исследуется.

- для каждой объединенной пробы используется отдельная ёмкость для смешивания и мерный стакан для отбора.

- объединенная проба молока маркируется с указанием хозяйства, фермы, номера пробы по описи, количества животных в пробе.

1.Образцы молока следует оставить в холодильнике, пока не сформируется четкий слой сливок (через 24-48ч) или центрифугируют в течении 10 мин 2000 об\мин. Перед проведением теста слой сливок удаляют или автоматичеким дозатором на 5-10 мл отбирают 5мл обезжиренного молока, салфеткой удаляют остатки сливок с наружной части наконечника и переносят в пробирку Флоринского.

2.Растворяем 20% концентрат промывочного раствора 100мл - 1900 мл дистиллированной воде.

3.Восстановление контрольных образцов молока: - растворяем позитивный и негативный контроли1мл дистилированной воды в разведении 1:10

4.На вспомогательную пластинку вносим по 250 мкл испытуемого молока.

5.в каждую лунку микротитр, пластину. Вносим По 100 мкл. « Буфер для разведения 1» заливаем 100 мкл. отрицательного контроля в лунку А-1;

6.100 мкл.,положительного контроля в лунку В-1;

7.100 мкл. положительного контроля в лунку С-1;

8.По 100 мкл. испытуемых образцов молока в Д-1; и т.д.

Плотно закрыть пластину. И Инкубируем 90 мин. ( ±5 мин.) приt +37° С ( ± 3° С ) и выливаем.

9.Заливаем по 300 мкл. в каждую лунку и промываем 3 раза.

10.Развести конъюгат: 1: 100 в « Буфер для разведения 1"( 10мл. буфер 1 — отнять

0,1мл. + 0,1 мл конъюгата).

11.Конъюгат залить по 100 мкл в каждую лунку. Накрываем мкропластинку и Инкубируем 30 мин.( ±3 мин.) при t +37С ( ± 3° С ) и выливаем.

12.Промываем 3 раза по 300 мкл.

13.После последней промывки, положить пластину на впитывающее поло­тенце, чтобы полностью освободить лунки от промывочного раствора!

14.Залить по 100 мкл. «ТМВ» (раствор выявления с помощью окрашивания-3) В каждую лунку.

Инкубировать 20 мин. при t +21° С ( ± 5° С ), закрыть от света ( хранить в темном месте).

15.Залить по 100мкл. «Стоп- раствора» ( раствор для остановки реакции) в каждую лунку

16.Слегка взболтать пластину, пока цвет раствора не станет однородным. Тщате­льно вытереть нижнюю сторону пластины.

17.Проводим измерение на спектрофотометре и записываем результаты. Учет реакции в течение 1 часа, после « Стоп - раствора», при условии, что

пластина хранится в темноте.

18.Реакция считается достоверной при:

- Положительный контроль имеет не откорректированное значение ОD 450 выше чем 0,300

- Положительный контроль / Отрицательный контроль- равно или больше 2

Показание: С/Р%= (OD образца \ ОD положит, контр)×100

ИНТЕРПРИТАЦИЯ -Пробы ниже 100% - отрицательные.

-Пробы Выше 100% - положительные.

Дата добавления: 2014-06-19; просмотров: 352; Нарушение авторских прав

Мы поможем в написании ваших работ!