ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА «БИОХИМИЯ МОЧИ»

1. Определение рН мочи универсальной индикаторной бумагой.рН нормальной мочи колеблется от 4,8 до 7,0, составляя в среднем 6,0. Кислотность нормальной мочи зависит главным образом от соотношения NaH₂PO₄ и Na₂HPO₄. На величину рН мочи влияет характер пищи. При различных заболеваниях могут наблюдаться сдвиги рН как в кислую, так и в щелочную стороны.

Каплю мочи стеклянной палочкой наносят на полоску индикаторной бумаги. Определяют значение рН, сравнивая полученную окраску с цветной шкалой.

2. Определение неорганических составных частей мочи.При выпаривании суточного объема мочи остается сухой остаток в количестве 47-65 г, из них 15-25 г составляют неорганические вещества. Наиболее важные катионы мочи Na⁺, K⁺, NH₄⁺, Са²⁺, Mg²⁺, анионы - С1^-, SO₄^2-, Н₂РО₄^-, НРО^2-, РО₄^3-, НСО₃^-, СО^2-, С₂О₄^2-. В незначительных количествах могут присутствовать микроэлементы.

2.1. Открытие хлоридов в моче.К 1 мл мочи добавляют 5 капель 5% раствора азотной кислоты для предотвращения выпадения осадка фосфата серебра, который растворим в азотной кислоте. Прибавляют 4—5 капель 1% раствора нитрата серебра. Выпадает белый творожистый осадок.

2.2. Открытие фосфатов в моче.3—5 мл мочи подщелачивают несколькими каплями раствора аммиака и ждут 2—3 минуты до полного осаждения фосфатов кальция, магния и двойного фосфата магния и аммония. Осадок отфильтровывают, а фильтрат, содержащий растворимые фосфаты натрия и калия, сохраняют. Воронку с осадком на фильтре переставляют в другую пробирку, промывают осадок 2 раза дистиллированной водой и растворяют на фильтре в 1—2 мл 10% раствора азотной кислоты. К азотнокислому раствору добавляют 1 мл раствора молибдата аммония и нагревают. Выпадает желтый кристаллический осадок фосфоромолибдата аммония. К сохраненному фильтрату добавляют по каплям магнезиальную смесь до образования белого кристаллического осадка MgNH₄PO₄, в виде которого выпадают растворимые фосфаты натрия и калия (NaH₂PO₄, КН₂РО₄, К₂НРО₄).

2.3. Открытие кальция и магния в моче.Кальций и магний выделяются кишечником, в меньшей степени — почками. При смешанной пище в норме суточное содержание кальция 0,3—0,4 г (в расчете на СаО), магния — 0,06—0,2 г (в расчете на MgO).

В пробирку вносят 1 мл мочи, прибавляют 2 капли 10% раствора уксусной кислоты и 3-5 капель насыщенного раствора оксалата аммония. Жидкость в пробирке встряхивают. Белый кристаллический осадок оксалата кальция отделяют фильтрованием. К фильтрату добавляют 4—5 капель 10% раствора аммиака (до щелочной реакции на лакмус). Постепенно выпадает осадок (в виде мути) двойного фосфата магния и аммония, не растворимый в аммиаке, но растворяющийся в органических и минеральных кислотах.

2.4. Открытие аммонийных солей в моче.В пробирку наливают 2 мл мочи и 1 мл известкового молока. Подносят к отверстию пробирки смоченную водой красную лакмусовую бумажку, не прикасаясь ею к стенкам пробирки. Через некоторое время лакмусовая бумажка синеет вследствие выделения аммиака.

3. Органические составные части мочи.К органическим составным частям мочи относятся пировиноградная кислота, мочевые пигменты, мочевина, креатинин, мочевая кислота, аминокислоты, гиппуровая кислота и др. С мочой выводятся также некоторые ферменты, витамины, гормоны. К патологическим составным частям мочи относятся белок, глюкоза, ацетоновые тела, желчные и кровяные пигменты, гомогентизиновая и фенилпировиноградная кислоты.

3.1. Качественное обнаружение и количественное определение белка в моче.В норме в моче человека содержится минимальное количество белка (у взрослого от 20 до 60 мг, у детей — от 3 до 47 мг за 24 часа), присутствие которого не может быть доказано обычно применяемыми в лаборатории реакциями. При ряде заболеваний количество белка в моче увеличивается, и он начинает определяться обычными методами. Цветные реакции не пригодны для открытия белка в моче из-за наличия собственной окраски у мочи. Кроме того, она может содержать вещества, препятствующие появлению характерной окраски. Чувствительность реакций на белок в моче меняется в зависимости от состава мочи.

3.1.1. Проба с сульфосалициловой кислотой.Проверяют реакцию мочи. Мочу щелочной реакции подкисляют 2-3 каплями 5-10% раствора уксусной кислоты. В пробирку наливают 3 мл мочи и прибавляют 6 капель 20% раствора сульфосалициловой кислоты. Моча, содержащая белок, мутнеет (положительная проба). Результаты читают на темном фоне. Проба с сульфосалициловой кислотой одна из самых чувствительных, она открывает белок при содержании его в моче до 0,015 г/л. Однако проба дает ложноположительные результаты с некоторыми лекарствами (производными пенициллина).

3.1.2. Количественное определение белка в моче по методу разведения (метод Брандберг—Роберте— Стольникова).Экспериментально установлено, что если при взаимодействии слоя азотной кислоты и слоя мочи образование белкового кольца произойдет между 2 и 3 минутами, то в данной моче содержится 0,033 г/л белка. В пробирку помещают 1 мл 50% раствора азотной кислоты (или реактив Ларионовой) и осторожно по стенке пробирки наливают такое же количество мочи. При рассмотрении на темном фоне появление тонкого белкового кольца между 2-й и 3-й минутами на границе двух жидкостей указывает на наличие в моче 0,033 г/л белка. Если кольцо появляется раньше двух минут после наслоения, мочу следует развести водой и произвести повторное наслоение разведенной мочи. При этом подбирают такое разведение мочи, при наслоении которой кольцо образуется между 2-й и 3-й минутами. Если кольцо имеет нитевидную форму, мочу нужно развести в 2 раза, при широкой форме кольца — в 4 раза и при компактной форме — в 8 раз. Количество белка вычисляют путем умножения 0,033 г/л на степень разведения.

Расчет количества белка в зависимости от разведения мочи представлен в таблице.

3.2. Полуколичественное определение содержания глюкозы и кетоновых тел в моче при помощи тест-полосок.Тест-полоски «DIA PHAN» применяются для экспрессного анализа содержания глюкозы и кетоновых тел в моче. Наливают небольшое количество исследуемой мочи встаканчик или пробирку. Погружают тест-полоску в исследуемую мочу так, чтобы полностью смочить и нижний и верхний индикаторы, и сразу же извлекают. Через 1 минуту по наибольшему совпадению цвета индикаторов с цветной шкалой ориентировочно определяют концентрацию глюкозы и кетоновых тел в моче.

Дата добавления: 2015-07-26; просмотров: 299; Нарушение авторских прав

Мы поможем в написании ваших работ!