День первый

Определения рабочего разведения ИПК и концентрацию иммобилизованного антигена.

(шахматное титрование)

День первый.

1. Согласно методике приготовления образцов (см. Методика 4) приготовить раствор антигена по 4000 мкл в стеклянной пробирке на 5 мл в 0,05 М Na-бикарбонатном буфере, рН 9,5,с концентрацией 10 мкг/мл.

2. В предварительно подготовленный планшет в лунки при помощи одноканальной автоматической пипетки на 200 мкл разлить раствор, приготовленный в п.1, по 200 мкл в лунки стрипа G, указанные в схеме1:

3.

Схема1

4. В пробирке должно остаться по 2000 мкл раствора антигена c концентрацией 10 мкг/мл. Далее необходимо провести раститровку: в пробирку прилить 2000 мкл 0,05 М Na-бикарбонатного буфера, рН 9,5, перемешать аккуратным пробулькиванием (5 раз) и перемешиванием раствора при помощи пипетки. Перенести полученное разведение в лунки стрипа F согласно схеме по 200 мкл. В пробирке остается 2000 мкл раствора. Т.о. получится новое разведение с шагом 2 (т.е. концентрация - 5 мкг/мл).Операцию повторять до тех пор, пока не получите окончательное разведение, которое делается с шагом 4.

5. Для контроля уровня неспецифической сорбции (кнс) в стрип Н внести (согласно схеме) по 200 мкл раствора неидентичного негомологичного белка в концентрации 10 мкг /мл в 0,05 М Na-бикарбонатном буфере, рН 9,5.

6. Все незанятые лунки заполнить физ. раствором по 200 мкл.

7. Планшет закрыть крышкой и поставить инкубироваться в холодильник при температуре 4+2 ⁰С на ночь (16-18 часов)

Дата добавления: 2015-07-26; просмотров: 165; Нарушение авторских прав

Мы поможем в написании ваших работ!