Лабораторная работа №13

Количественное определение мочевины в

Сыворотке крови уреазным методом

Принцип метода: мочевина под действием фермента уреазы разлагается на СО₂ и NН₃, последний в реакции с салицилатом натрия и гипохлоридом натрия в присутствии нитропруссида натрия образует окрашенный продукт, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации мочевины в пробе.

Реактивы и оборудование: 1) реагент 1 – раствор уреазы в фосфатном буфере; раствор салицилата натрия и нитропруссида натрия; 2) реагент 2 – раствор гипохлорита натрия и гидроокиси натрия; 3) образцы сыворотки крови; 4) калибровочный раствор мочевины с концентрацией 5,0 ммоль/л; 5) пробирки, пипетки; 6) термостат; 7) ФЭК.

Ход работы:

Пробы перемешать и инкубировать 5 мин при температуре 37⁰С, затем добавить:

После добавления реагента 2 пробы перемешать и инкубировать 5 мин при температуре 37⁰С.

Измерить оптическую плотность опытной (Д) и калибровочной (Д_к) проб против контрольной пробы при λ = 610 нм. Окраска стабильна в течение 2 час.

Результаты: Д₁=

Д₂= Д_к=

Для расчета концентрации мочевины использовать формулу:

С=Д₁/Д_к х 5,0 (ммоль/л)

С₁=

С₂= Норма : 2,5 – 8,3 ммоль/л

Выводы:

Дата добавления: 2015-07-26; просмотров: 240; Нарушение авторских прав

Мы поможем в написании ваших работ!