Тема 2 Измерение микроскопических объектов

Цель:Ознакомить с устройством микроскопа, рисовального аппарата и особенностями работы с ними

План:

1 Работа с микроскопом

2 Измерение микроскопических объектов

Методические рекомендации по подготовке к занятию

Измерение микроскопических объектов (пыльцевых зерен, хромосом, тетрад микро­спор и т. д.) производят с помощью специальных ли­неек— окуляр-микрометра и объект-микрометра. Шкала окуляр-микрометра имеет длину 0,5 или 0,1 см и раз­делена соответственно на 50 или 100 частей. Окуляр-микрометр либо вставляют в окуляр, либо он бывает вмонтирован в специальный измерительный окуляр. Вращая окуляр,. подводят измеряемый объект под шкалу окуляр-микрометра и производят измерение объекта. Однако цена деления окуляр-микрометра бы­вает разной в зависимости от того, с каким объективом мы рассматриваем объект. Для того чтобы определить цену деления окуляр-микрометра при различных объек­тивах и окулярах, пользуются специальной линейкой — так называемым объект-микрометром. Объект-микро­метр вмонтирован в металлическую оправу. Шкала его имеет длину 1 мм и разделена на 100 частей. Одно деле­ние шкалы объект-микрометра равно 10

Для проведения измерений и подсчетов необходима: объект-микрометр, окуляр-микрометр и препаратоводитель на столике микроскопа.

Объект-макрометр представляет собой металлическую или стеклянную пластинку в форме предметного стекла (рис.1). На этой пластинке обозначен круг, в центре ко­торого имеется шкала. Величина всей шкалы составляет I мм. Она разделена на 100 частей (рис.2). Интервалы между де­лениями обычно равны 0,01 мм, т.е. 10 микрометрам (сокра­щенное обозначение мкм) - это цена одного деления объект-макрометра. Эта величина всегда обозначена в виде марки­ровки на объект-макрометре. Объект-микрометр нужен для определения цены деления окуляр-микрометра, для определе­ния масштаба изображения на микрофотографиях и рисунках и для определения увеличения микроскопов со сложными оп­тическими системами.

Рис.1. Объект-микрометр

Окуляр-микрометр представляет собой тонкую круглую стеклянную (отдельную или вмонтированную в окуляр) пластинку, с нанесенной на ней линейной шкалой (рис.3.) Длина всей шкалы может равняться 5 мм. Она разделена на 50 частей, по.0,1 мм каждая, или же на 100 частей - по 0,05 мм каждая. Бывает шкала окуляр-микрометра длиной в 10 мм. Она разделена на 100 частей, по 0,1 мм каждая. Окуляр-микрометр вставляется между линзами окуляра. Та­кой окуляр-микрометр служит для линейных измерений.

Рис.2. Шкала объект-микрометра величиной в 10 мм, разделенная

на 100 частей

Рис.3. Линейный окуляр-микрометр со шкалой в 10 мм, разделен­ной на 100 частей

Для измерений плоскостей и для подсчета числа клеток в определенной площади используется сетчатый окуляр-микрометр. В нем на стеклянной пластинке нанесен квадрат. Дли­на сторон квадрата 10 мм. Каждая сторона квадрата разде­лена на 20 частей. В результате пересечения горизонталь­ных и вертикальных линий образуется сеточка, с интервала­ми между делениями 0,5 мм.

Величина стороны квадрата равна 10 мм и разделена на 20 частей Для измерения больших объектов и для повышения точ­ности измерений используется винтовой окуляр-микрометр. Отсчетный механизм его состоит из шкалы (от 0 до 8 мм) с интервалами между делениями в I мм, нанесенной на непод­вижной стеклянной пластинке, и сетки в виде двух рисок с перекрестием, нанесенной на подвижной стеклянной пластин­ке, а также микрометренного винта с отсчетным барабаном. Обе пластинки расположены в фокальной плоскости окуляра. Подвижная пластинка с рисками и перекрестием связана с микрометренным винтом так, что при его вращении перекрестие и риски перемещаются в поле зрения окуляра относи­тельно неподвижной шкалы. Шаг винта равен I мм. Таким об­разом, при повороте барабана винта на один полный оборот, риски и перекрестие в поле зрения окуляра переместятся на одно деление шкалы. Следовательно, неподвижная шкала в по­ле зрения служит для отсчета полных оборотов барабана вин­та, т.е. для отсчета полных миллиметров, на которые пере­мещается перекрестие и риски окуляр-микрометра. Барабан винта разделен на 100 частей. При шаге винта в I мм пово­рот барабана на одно деление соответствует перемещению перекрестия и рисок на 0,01 мм. Таким образом, шкала ба­рабана служит для отсчета сотых долей миллиметра.

Полный отсчет по шкалам окуляр-микрометра складыва­ется из отсчета по неподвижной шкале и отсчета по бараба­ну винта. Отсчет по неподвижной шкале в поле зрения' опре­деляется положением перекрестия и рисок, т.е. подсчитыва­ется, на сколько полных делений шкалы они переместились, считая от нулевого деления шкалы. При отсчете по бараба­ну микрометренного винта, определяют, какое деление шкалы барабана приходится против индекса, расположенного на подвижной части винта- Пределы измерения винтовым окуляр-микрометром - от 0 до 8 мм.

Линейное измерение объектов. Величина объектов измеряется единицами длины микрометрами (мкм), которые раньше назывались микронами.

Изображение объектов под микроскопом измеряется оку­ляр-микрометром в делениях его шкалы. Поворотом окуляра, в который вложен окуляр-микрометр, и перемещением препаратоводителя на столике микроскопа, совмещают шкалу оку­ляр-микрометра с измеряемым объектом по направлению из­мерения. Определяют сколько делений окуляр-микрометра приходится на длину (ширину) объекта. При работе с вин­товым окуляр-микрометром, наблюдая в окуляр и вращая ба­рабан по часовой стрелке, подводят центр перекрестия до совмещения с краем измеряемого объекта и делают первый отсчет по шкалам окуляр-микрометра по положению рисок.

Литература :8, с.185-188

Контрольные вопросы:

1 Назовите детали оптического микроскопа и какую роль они выполняют

2 Расскажите о последовательности работы с оптическим микроскопом

3 Как можно узнать увеличение объекта?

4 На каком расстоянии от изучаемого объекта должен находиться малый и большой объективы?

5 Какую сторону зеркала используют для нахождения света в различных условиях работы?

Тема 3 Клетка и ее органоиды в световом и электронном микроскопе(клетка животных)

Цель:Ознакомить с клеткой и ее органоидами в световом и электронном микроскопе

План: 1 Работа с микроскопом

2 Изучение органоидов летки

Методические рекомендации по подготовке к занятию

Для первого ознакомления с клетками животных вы­бирают в качестве объекта хвостатых амфибий, имеющих среди позвоночных самые крупные клеточные элементы. Препарат представляет собой поперечный разрез доли пе­чени, имеющей вид полоски.

При слабом увеличении на периферии среза виден лимфоидный слой с густо расположенными ядрами. Здесь у амфибий образуются лейкоциты; подобные же скопления лейкоцитов попадаются и в центральных частях среза. Остальная масса органа образована печеночными клет­ками — гепатоцитами, располагающимися вокруг крове­носных сосудов; разрезы этих сосудов, частью пустые, частью заполненные кровяными клетками, легко заметить и при слабом увеличении. Между гепатоцитами видны темные пигментные клетки.

Ядра гепатоцитов, как обычно в многогранных клет­ках, имеют округлую форму. Величина их зависит от раз­реза: ядра, разрезанные ближе к экватору, крупнее, а раз­резанные ближе к полюсу — мельче. Изредка встречаются двухядерные клетки. В некоторых клетках ядер не видно, так как разрез клетки прошел мимо ядра.

Лейкоциты, расположенные в лимфоидном слое и в виде скоплений между гепатоцитамй, а иногда и в просвете сосудов, имеют округлую форму; ядра лейкоцитов очень разнообразны по форме: бобовидные, лопастные, кольце­видные или разделены на сегменты, связанные тонкими перемычками.

Митохондрии представляют собой клеточный органоид, в состав которого входит комплекс липоидно-белковых ве­ществ. При обычных фиксациях этот комплекс не сохраня­ется, а потому на обычных препаратах митохондрии не видны (изредка они сохраняются при формалиновой фиксации). Для их сохранения употребляются фиксаторы, в состав которых входит осмиевая кислота, фиксирующая липоиды и переводящая их в такое состояние, при котором они со­храняются во время дальнейшей обработки. Для окраски митохондрий существует ряд методов, из которых наиболее простым и надежным является окраска железным гематок­силином по Гейденгайну

Пластинчатый аппарат еще более, чем митохондрии, нуждается в специальных методах выявления, так как липоидно-белковый комплекс, образуемый этим аппаратом, значительно лабильнее, чем у митохондрий. Существует два метода выявления аппарата для световой микроскопии:серебрение и продолжительное осмирование. В обоих ме­тодах препараты не нуждаются в последующем окрашивании. Элементы препарата чернятся и выделяются на более свет­лом фоне.

При слабом увеличении видно, что железистые клетки поджелудочной железы имеют приблизительно конусовид­ную форму. Секрет (продукт, подлежащий выделению) скопляется в апикальной (верхушечной) части клетки. Ближе к базальной части располагается ядро. Нужно выбрать группу удачно разрезанных секреторных клеток (желательно, чтобы разрез проходил вдоль конуса) и при сильном увеличении проверить степень выявления в клет­ках аппарата.

Центросома представляет собой органоид, для выявле­ния которого не существует специальных методов. Лучше он обнаруживается на препаратах, фиксированных сулемо­выми смесями, и при окраске железным гематоксилином. Однако нужно иметь в виду, что и при указанных методах центросома видна далеко не постоянно, так что этот органоид принадлежит к числу трудновыявляемых стру­ктур

Литература 6, с 27-35

Контрольные вопросы:

1 Какие компоненты клетки можно рассмотреть в оптический микроскоп?

2 Какие органеллы составляют структуру клетки?

Дата добавления: 2014-12-09; просмотров: 630; Нарушение авторских прав

Мы поможем в написании ваших работ!