Трифенилтетразольными реакциями

Для дифференциации грамотрицательных бактерий в мясе ставят трифенилтетразольные реакции, одновременно добавляя к мясным эмульсиям различные сахара или некоторые другие компоненты. Если в эмульсии есть сахар, который усваивается бактериями, происходит активное их размножение; ферментативная активность бактерий повышается, и реакция становится резко положительной. При значительной концентрации сахара, который не сбраживается под воздействием ферментов бактерий, в среде повышается осмотическое давление. В этом случае рост бактерий, а также ферментативная активность их задерживаются (иногда отмечают частичное отмирание бактерий), и реакция с трифенилтетразолом будет слабо выражена или отрицательна.

Ход определения. Образцы мяса, в которых обнаруживают грамотрицательную микрофлору, подвергают дальнейшему исследованию для определения вида бактерий. Для этого в гомогенезаторе готовят мясную эмульсию (3,5 г мяса на 35 мл физиологического раствора), разливают ее в семь пробирок по 5 мл и в каждую вносят по 0,25 мл 1 %-ного раствора трифенилтетразолиума хлористого. Затем в первые пять пробирок добавляют- по 0,5—0,6 г следующих. Сахаров или многоатомных спиртов: в первую — лактозу, во вторую — глюкозу, в третью—сахарозу, в четвертую — маннит, в пятую — арабинозу, в шестую — раствор бриллиантгрюн для создания концентрации 1 : 300 000 (приливают 0,5 мл раствора бриллиантгрюн в разведении 1 : 30 000). Все пробирки ставят в термостат или в водяную баню с температурой воды 37°. Учитывают реакции через 3 часа.

Бактерии кишечных и протеусных групп различают последующим признакам:

1)кишечная палочка восстанавливает тетразол в эмульсии с бриллиантгрюн, а протей не восстанавливает.

Группу сальмонелл от кишечной палочки дифференцируют по трифенилтетразольным реакциям, добавляя в среду лактозу и бриллиантгрюн. Если в мясе есть кишечная палочка, реакции в этих пробирках положительные, если салмонеллы — отрицательные.

Из бактерий рода сальмонелла наиболее активно восстанавливает трифенилтетразол бактерия энтеритидис, на втором месте — бактерия тифимуриум, на третьем — бактерия холера суис. Отличить бактерию холера суис от салмонелл других видов можно по трифенилтетразольной реакции, используя арабинозу (бактерия холера суис дает отрицательную реакцию, другие салмонеллы — положительную).

Если в лаборатории нет гомогенизатора, то допускается измельчать мясо до состояния фарша ножницами. Его растирают с физиологическим раствором в ступке и ставят реакцию так же, как и с мясными эмульсиями. При таком способе приготовления вытяжки реакции учитывают через 10—12 часов.

Трифенилтетразольными методами можно определять грамотрицательные бактерии в мясе, во внутренних органах, лимфатических узлах, в мясных полуфабрикатах, колбасах.

Санитарная оценка мяса. Положительная цветная окислительная реакция и красный цвет мясных эмульсий при постановке реакций с трифенилтетразолиумом хлористым свидетельствует об обсемененности мяса токсигенными микроорганизмами. Для установления вида бактерий такое мясо исследуют бактериологическим методом. Без бактериологического исследования мясо можно реализовать только после трехчасовой проварки.

Дата добавления: 2015-06-30; просмотров: 162; Нарушение авторских прав

Мы поможем в написании ваших работ!