Главная страница Случайная лекция
Мы поможем в написании ваших работ!
Порталы:
БиологияВойнаГеографияИнформатикаИскусствоИсторияКультураЛингвистикаМатематикаМедицинаОхрана трудаПолитикаПравоПсихологияРелигияТехникаФизикаФилософияЭкономика
Мы поможем в написании ваших работ!
Рекомбинантные микроорганизмы
|
Читайте также: |
Таблица 5.
Методы и принципы анализа трансформированных клеток и трансгенных организмов (И.В. Тихонов, 2005)
| Метод | Основные принципы |
| Фенотипиче- ский отбор | Анализ основан на использовании специфических свойств, проявляемых нужным клоном. К ним относятся морфологи- ческие изменения трансформированных клеток (например, характера их роста) или синтез определенных соединений, которые можно идентифицировать при помощи стандартных биохимических методов |
| Иммунохимиче -ский анализ | Для проведения идентификации белка, кодируемого перене- сенным геном, используют специфические антитела. Детек- тирование связывания антител с нужным белком проводят при помощи вторичных антител, специфичных в отношении первых, меченых ферментом или радиоактивной меткой |
| Полимеразная цепная реакция | Проводят амплификацию последовательности перенесенного гена при помощи специфических праймеров. Идентифика- цию ПЦР-продуктов проводят при помощи гельэлектрофореза |
| Гибридизация | Изолируют тотальную ДНК, обрабатывают рестриктазами и фракционируют при помощи гель-электрофореза. Денатури- руют ДНК в геле и переносят на нейлоновую мембрану. Мембрану инкубируют с денатурированным (или одноцепо- чечным) радиоактивным фрагментом (зондом), гомологич- ным перенесенному гену. Отожженный зонд детектируют при помощи радиоавтографа. Аналогично проводят гибри- дизацию ДНК-зонда с тотальной мРНК, выделенной из трансформированных клеток |
Очень эффективным при получении рекомбинантных клеток в ряде случаев оказывается метод слияния протопластов. Этот метод применим как для микробных, так и для растительных клеток. Известно несколько способов разрушения оболочек бактериальных клеток при помощи фермента лизоцима, дрожжевых клеток - при помощи ферментов желудочного сока улиток или комплексов микробных ферментов (дрожжелитина). После слияния протопластов образуются гибридные клетки, в которых возможна рекомбинация генов.
Рекомбинантные штаммы бактерий и дрожжей широко используют для микробиологического синтеза белков, витаминов, аминокислот, антибиотиков и других ценных соединений.
Методами генной инженерии можно усиливать природную способность определенных видов бактерий к осуществлению специфических биологических процессов и создавать высокоэффективные штаммы микроорганизмов, осуществляющие разрушение токсичных субстратов или способствующие росту культурных растений.
Большой интерес представляет производство в клетках микроорганизмов белков терапевтического назначения. С этой целью кДНК, несущую информацию о структуре нужного белка, клонируют в экспрессирующем прокариотическом векторе, что позволяет достичь высокого уровня экспрессии. Рекомбинантные бактерии выращивают на специальных питательных средах, позволяющих отличить их от «диких» штаммов по изменению фенотипических свойств (изменению морфологию колоний) или угнетающих рост нерекомбинантных клеток.
Некоторые примеры использования рекомбинантных микроорганизмов и продуктов микробного синтеза представлены в табл.6.
| <== предыдущая страница | | | следующая страница ==> |
| Методы генной инженерии | | | Трансгенные животные |
Дата добавления: 2014-03-03; просмотров: 771; Нарушение авторских прав
Мы поможем в написании ваших работ!