Количественное определение холестерина в сыворотке крови

по модифицированному методу Златкис-Зака*

Принцип метода: содержащийся в плазме или сыворотке крови свободный и эфирносвязанный холестерин окисляется хлорным железом в присутствии концентрированной серной и ортофосфорной кислот с образованием ненасыщенных продуктов, окрашенных в красно-фиолетовый цвет. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации холестерина (присутствие следов воды мешает развитию окраски !).

Реактивы и оборудование: 1) Реактив для цветной реакции:

● основной раствор красителя (2,5 г хлорного железа растворить в 100 мл ортофосфорной кислоты), ● рабочий раствор красителя (8,0 мл основного раствора развести до 100 мл концентрированной серной

кислотой); 2) этанол; 3) калибровочный раствор холестерина в этаноле,

содержащий 1,6 мг/мл (3 ммоль/л); 4) штатив с химическими пробирками (сухими!); 5) микропипетка для взятия сыворотки на 0,1 мл; 6) пипетка на 2мл; мерная центрифужная пробирка для отмеривания реактива для цветной реакции; 8) фотоэлектроколориметр.

Ход работы: в пробирку прибавляют микропипеткой 0,1 мл сыворотки крови, добавляют 1,4 мл этанола. Осторожно по стенке пробирки добавляют 2,0 мл реактива для цветной реакции, пробу хорошо встряхивают (но осторожно, направляя при этом отверстие пробирки от себя и окружающих), оставляют на 30 минут при комнатной температуре. Развивается красно-фиолетовая окраска. Полученный окрашенный раствор колориметрируют на ФЭКе, против реактивов без добавления сыворотки крови. Светофильтр зеленый (λмакс.= 540 нм). Расчет концентрации холестерина проводится с помощью калибровочной кривой.

Результаты: Д₁= С₁=

Д₂= С₂=

содержание холестерина рассчитывают по формуле

Х = С × 100/0,1 = мг% × 0,0258 = ммоль/л, где

0,1 - количество мл сыворотки, взятое на исследование

С - количество холестерина в крови в мг, найденное по калибровочному графику после определения оптической плотности пробы (Д).

Норма содержания холестерина в сыворотке крови 3,6-6,4 ммоль/л.

Дата добавления: 2015-07-26; просмотров: 315; Нарушение авторских прав

Мы поможем в написании ваших работ!