Студопедия

Главная страница Случайная лекция

Порталы:

БиологияВойнаГеографияИнформатикаИскусствоИсторияКультураЛингвистикаМатематикаМедицинаОхрана трудаПолитикаПравоПсихологияРелигияТехникаФизикаФилософияЭкономика






ДИАГНОСТИКА

Читайте также:
  1. АНТЕНАТАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА ВРОЖДЕННОЙ ХИРУРГИЧЕСКОЙ ПАТОЛОГИИ
  2. ГЛАВА 5. СПОРТИВНАЯ ПСИХОДИАГНОСТИКА
  3. Диагностика
  4. Диагностика
  5. ДИАГНОСТИКА
  6. Диагностика внутренних кровотечений
  7. Диагностика групповых процессов
  8. ДИАГНОСТИКА ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЕЙ
  9. Диагностика знаний по этнопедагогике

ИБ трудно выявляемая инфекция, которая распространяется незаметно, маскируется другими болезнями и физиологическими нарушениями и лишь при типичном течении срав­нительно легко диагностируется по клиническим и патологоанатомическим признакам. Вне­запное появление болезни, сопровождающейся массовыми водянистыми поносами, высокой заболеваемостью, быстрым распространением и переболеванием в течение 5-7 дн и зубча­той кривой смертности, дают основание заподозрить наличие ИБ в хозяйстве. Подтвержде­нием диагноза может быть обнаружение характерных изменений в фабрициевой сумке. На ранней стадии или при субклиническом течении необходимы лабораторные исследования. Идентификацию вируса проводят с помощью РН и ИФА в модификации, соответст­вующей цели исследования и на соответствующих тест-системах. Наличие вируса в мазках из фабрициевой сумки определяют с помощью иммунопероксидазного окрашивания в при­сутствии авидин-биотинпероксидазного комплекса с использованием монАТ вирусу ВК70. Этот тест наиболее быстрый и высокоспецифичный.

Экспресс-диагностика. В настоящее время методы экспресс-диагностики детально не разработаны и не узаконены. Имеются сообщения о возможности применения в качестве та­ковых непрямого варианта ИФА и ИФ. Разработана схема постановки ПЦР, осущест­влен подбор вирусспецифических праймеров.

Выделение вируса. Успех выделения вируса зависит от срока после заражения и воз­раста инфицированной птицы. Выделение вируса обычно успешно до 14 дн после зараже­ния, а РДП и ИФ - до 3-5-го дня после заражения, эти реакции и более надежны, если ста­вятся с бурсальной тканью. Вирус ИБ обнаруживается в мышечном желудке, 12-перстной кишке и почках через 12 ч, а в селезенке и бурсе через 24 ч после заражения цыплят per os. Наилучшим сроком выделения вируса из пораженной бурсы является период - 4-8 дн. Глав­ная система репликации вируса - это лимфоциты, макрофаги и ретикулярные клетки бурсы, а также лимфоидные клетки слепой кишки.

Взятие и подготовка материала. Для лабораторных исследований от павшей или уби­той птицы берут фабрициеву сумку, печень, селезенку, почки. Пробы отбирают при появ­лении первых клинических признаков болезни (в течение первых 7 дн). Через неделю после начала болезни вирус практически выделить не удается. Материал пересылают в лабораторию в термосе со льдом. Из кусочков патматериала готовят 10%-уею суспензию на изото­ническом р-ре NaCl, центрифугируют 15 мин при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость, после добавления антибиотиков (пенициллин 1000 ЕД/мл и стрептомицин 100 мг/мл), вы­держивают в холодильнике при 4°С 6-12 ч и используют для заражения КЭ, культур клеток и восприимчивой птицы.

Заражение куриных эмбрионов. Используют 10-11-дн SPF-эмбрионы или эмбрионы из хозяйств, благополучных по инфекционным заболеваниям КЭ заражают на ХАО обще­принятым способом, инкубируют 10 дн, ежедневно овоскопируют В первые 24 ч после за­ражения гибель их считается неспецифической. Погибшие КЭ вскрывают в день гибели по­сле охлаждения при 4°С в течение 2-3 ч, а живые - на 10-й день инкубации, также после ох­лаждения. При наличии вируса КЭ гибнут на 3-7 день после заражения с характерными из­менениями. На 3-й день после заражения отмечают гиперемию и точечные кровоизлияния на коже в области головы и конечностей, иногда незначительные утолщения и помутнение ХАО. На 4-5-й день появляются отеки подкожной клетчатки в области головы и брюшной стенки зародыша, многие эмбрионы отстают в развитии. Печень у них увеличена, желтова­того цвета, с зеленовато-белыми очажками различной формы на поверхности. Селезенка увеличена, бледная, с некротическими очажками величиной с просяное зерно. Сердечная мышца бледная, фабрициева сумка без видимых изменений.



Заражение культуры клеток.Для изоляции вируса используют 24-48-4 культуры ФЭК Срок наступления ЦПД зависит от дозы вируса и числа пассажей. При первичном его выделении специфические изменения обычно наблюдаются после 2-3 пассажей вируссодержащего материала. ЦПД проявляется через 49-72 ч после инфицирования клеток и характе­ризуется образованием в монослое пустот, вакуолизацией и округлением клеток, в дальней­шем цитолизом и пикнозом ядер, образованием клеточных конгломератов, соединенных цитоплазматическими тяжами. Специфичность ЦПИ подтверждается заражением КЭ и поста­новкой РН. Рекомендуется использовать для этого линию клеток лейкозных опухолей -LSCE-BK3. Изоляты вируса в культуре ФЭК или клетках почки цыплят обычно проверяют по следующим параметрам: ЦПД, терморезистентность, устойчивость к хлороформу, тип нуклеиновой кислоты, отсутствие внутриклеточных включений, отрицательная гемагглютинация, АГ тождественность референтным штаммам вируса

Заражение цыплят. Биопробу на цыплятах ставят с целью выделения вируса, изучения его патогенности, а также экспериментального воспроизведения заболевания. Заражают цы­плят 21-25-дн возраста, не имеющих AT к вирусу. Исследуемый материал вводят интрана-зально в дозе 0,5 мл, на конъюнктиву, в фабрициеву сумку или per os 10-15 цыплятам, за которыми наблюдают 15 дн. Результаты оценивают учитывая клиническое проявление бо­лезни, патологоанатомические изменения, наличие специфических AT в сыворотке крови. Наиболее восприимчивы к вирусу ИБ SPF-цыплята 20-сут возраста и 40-сут цыплята из промышленных интактных к ИБ стад. Установлено, что взрослые SPF-куры болеют ИБ, хо­тя клинические признаки у них менее выражены. Для биопробы используют гомогенезированную ткань бурсы Фабрициуса. Клинические симптомы появляются на 3-й день, а на 4-й наблюдается обширное поражение бурсы. Поражение бурсы проявляется через 1 сут после заражения и характеризуется исчезновением небольших зон лимфоцитов, которые состав­ляют сетчатую структуру фолликулов. Через 1-5 дн после заражения появляются гетерофилы, пикнотический дебрис и множество ретикулярных клеток, заменяющих новые быстро исчезающие лимфоциты. В селезенке наблюдается гиперплазия ретикулоэндотелиальных клеток. В миндалинах слепой кишки отсутствуют фолликулы и лимфоциты. В почках появляются большие цилиндры гомогенного инфильтрированного материала. При инокуляции слабовирулентного вируса ИБ симптомы болезни и видимые патологоанатомические изме­нения в органах и тканях могут и не развиваться. В этом случае результаты биопробы оце­нивают по обнаружению вирусспецифического АГ и AT в РН и РДП.


<== предыдущая страница | следующая страница ==>
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ. Гемагглютинирующие свойства не установлены | Индикация и идентификация вируса. Вирусоскопия, электронная и иммуноэлектронная микроскопия

Дата добавления: 2014-03-03; просмотров: 220; Нарушение авторских прав


lektsiopedia.org - Лекциопедия - 2013 год. | Страница сгенерирована за: 0.003 сек.