Источники питания и погрешности при проведении электрофореза

Все виды электрофоретического разделения основаны на движении заряженных молекул или частиц в электрическом поле. Для создания соответствующей напряженности поля необходимы подходящие источники постоянного тока. Чаще всего для этой цели применяют устройства, преобразующие переменный ток в постоянный, напряжение которого можно регулировать. Источник питания с помощью металлических проводов присоединяют к электродам, встроенным в прибор для электрофореза. Электроды, которые обычно изготавливают из благородных металлов, погружают в буфер, заполняющий электродные сосуды. Эти электродные растворы обеспечивают непрерывность электрического поля в цепи, состоящей из энергопитающего прибора, анода, исследуемой пробы, электрофоретической среды и катода.

Сопротивление в электрофоретической ячейке колеблется в ходе опыта, что обусловлено несколькими причинами. Электрофорез всегда сопровождается электролизом, приводящим к образованию водородных ионов на аноде и гидроксильных на катоде. Поскольку проводимость этих ионов примерно на порядок выше проводимости других ионов, присутствующих в буфере, электролиз может вызвать снижение общего сопротивления электрофоретической цепи. С другой стороны, сопротивление ячейки в зависимости от используемой электрофоретической системы может также и возрастать в процессе разделения. Так как напряженность электрического поля, выраженная в В/см, определяет ту силу, которая заставляет заряженные молекулы двигаться, для получения воспроизводимых результатов очень важно как можно более эффективно стабилизировать электрические параметры в ходе опыта. Зависимость между напряжением, током и сопротивлением задана законом Ома: если происходит изменение сопротивления, то напряжение или ток, или оба вместе должны также измениться.

Электрофорез на бумаге обычно проводят при постоянном напряжении.

При всех видах электрофоретических процедур очень важно избегать повышения температуры в системе или по крайней мере в ее определенной части. Это объясняется не только тем, что большинство биологических макромолекул термолабильны, но и тем, что местный перегрев вызывает изменение сопротивления, а следовательно, и однородности электрического поля, что неизбежно приводит к получению невоспроизводимых результатов.

4. Устройство и схема включения электрофоретической установки.

Устройство электрофоретической установки приведено на рис. 1:

Рис.1. Устройство электрофоретической установки: 1 - основание из изолирующего материала; 2 - ванночки, высверленные в этом основании; 3 - электроды; 4 - клеммы для подключения установки к источнику постоянного тока.

Схема включения электрофоретической установки приведена на рис. 2.

Рис. 2. Схема включения электрофоретической установки.

В качестве источника постоянного тока в схеме используется аппарат гальванизации. Так как электрофорез на бумаге проводится при поддержании постоянным напряжения, параллельно электрофоретической установке включается вольтметр постоянного напряжения. При подключении электрофоретической установки необходимо соблюдать полярность электродов.

Дата добавления: 2014-05-02; просмотров: 501; Нарушение авторских прав

Мы поможем в написании ваших работ!