Биохимические методы

Основаны на обнаружении отклонений в биохимических реакциях, происходящих в организме, связанных с изменением генотипа. «Объектами» биохимической диагностики являются биологические жидкости: моча, пот, плазма и сыворотка крови, эритроциты, лейкоциты, культуры фибропластов, лимфоцитов. Появление кетонов в моче младенца позволяет установить заболевание фенилкетонурию и перевести ребёнка на специальную диету. Переливание крови при гемофилии приводит к остановке кровотечения. Введение гормонов роста предотвращает карликовость.

Биохимические методы – это электрофорез, хроматография, спектроскопия, масс-спектрометрия, бомбардировка быстрыми нейтронами

Практически во всех случаях биохимическая диагностика начинается с просеивающего подхода (скрининг-методы), т. к. определять для каждого больного многие метаболиты очень трудоёмко и дорого. Существуют массовые просеивающие программы диагностики среди новорождённых на фенилкетонурию, гипотиреоз, врождённую гиперплазию надпочечников, муковисцидоз, галактоземию, и селективные диагностические.

Высушенные капли капиллярной крови новорождённых на хроматографической или фильтровальной бумаге пересылвют из родильных домов в лабораторию (можно по почте). Материал должен поступить в течении 2-3 дней после взятия пробы.

Для диагностики ФКУ кровь новорождённых берут в родильном доме на третий-пятый день после рождения. Если кровь взята раньше, то возможны ложноположительные результаты. В лаборатории в пятнах крови определяют количество фенилаланина с помощью любого из следующих методов: микробиологический тест Гатри, флуорометрия, распределительная хроматография на бумаге, тонкослойная хроматография (каждая лаборатория выбирает более подходящий для её условий метод).

Тест Гатри – из пятки новорождённого берут каплю крови на диски фильтровальной бумаги и помещают их на агаровую культуру В. subtillis. Последнюю выращивают на минимальной питательной среде, содержащей антиметаболит искомой аминокислоты ( например.фенилаланина), который должен одновременно тормозить рост микробов. При наличии в крови младенца большого количества фенилаланина разрушается антиметаболит, и микробы начинают бурно расти. Меняя антиметаболиты с помощью этого теста можно диагностировать наличие в крови определённых аминокислот и углеводов (лейцина, гистидина, фруктозы, галактозы и др.)

Химические экспресс-методы – используют простые цветные реакции для быстрой предварительной диагностики. Например, для диагностики ФКУ новорождённым в пелёнки заворачивают полоску фильтровальной бумаги, смоченной 10% раствором FeCl₃. При наличии в моче фенилпировиноградной кислоты наблюдается зелёное окрашивание фильтровальной бумаги.

Динитрофенилгидрозин используют для выявления кетокислот.

Тонкослойной хроматографией мочи и крови диагностируются нарушения обмена аминокислот, олигосахаридов, гликозаминогликанов (мукополисахаридов).

Газовая хроматография применяется для выявления наследственных болезней обмена органических кислот.

С помощью электрофореза гемоглобинов диагностируются гемоглобинопатии.

Врождённый гипотиреоз (снижение функции щитовидной железы) обусловлен разными причинами, проявляется задержкой умственного развития, резким отставанием в росте, отёчностью кожных покровов, развитием зоба. Суть массовой диагностики сводится к тому, что в крови ребёнка после 3-его дня жизни прверяют, нет ли снижения уровня тироксина (гормона щитовидной железы) в плазме крови и увеличено ли содержание тиреоидстимулирующего гормона – тиреотропного гормона гипофиза. В практике применяется радиоиммунный или иммуноферментный (иммунофлуоресцентный) методы. Тироксин и тиреоидстимулирующий гормон определяют в образцах крови новорождённых, предварительно высушенных на специальной фильтровальной бумаге. При положительном ответе диагноз подтверждается эндокринологом и лабораторным анализом гормонов щитовидной железы в сыворотке крови.

С помощью биохимических нагрузочных тестов можно выявлять гетерозиготных носителей патологического гена (Аа). Например при ФКУ исследуемому вводят внутривенно определённое количество аминокислоты фенилаланина и через равные промежутки времени определяют его концентрацию в крови. Если человек гомозиготен по доминантному гену (АА), то концентрация фенилаланина в крови быстро возвращается к контрольному уровню, который определяется до введения фениаланина. А если он гетерозиготен (Аа), то снижение концентрации фениаланина идёт вдвое медленнее. Аналогично проводятся тесты, выявляющие предрасположенность к сахарному диабету, гипертонии и др. Это уточняющая биохимическая диагностика путём количественного определения метаболита в крови.

Показаниями для применения биохимических методов диагностики у новорождённых являются такие симптомы, как судороги, кома, рвота, гипотония, желтуха, специфический запах мочи и пота, ацидоз, нарушенное кислотно-основное равновесие, остановка роста.

Дата добавления: 2014-11-24; просмотров: 393; Нарушение авторских прав

Мы поможем в написании ваших работ!