Для биохимических анализов

Для количественных биохимических определений необходима концентрированная водная вытяжка в соотношении мяса и воды 1 : 4.

Отвешивают навеску мяса в 25 г, мелко нарезают ножницами, растирают в фарфоровой ступке и добавляют немного воды из общего количества 100 мл. Мясную кашицу переносят в колбу, ступку промывают оставшимся количеством дистиллированной воды, которую сливают в ту же колбу. Колбу закрывают резиновой пробкой и взбалтывают 3 минуты, отстаивают и 2 минуты взбалтывают вновь. Вытяжку сначала фильтруют через три слоя марли, а потом через бумажный фильтр.

I Люминесцентный анализ. Визуальную люминесценцию производят с помощью прибора флюроскопа или аппарата «Ультрасвет УМ-1» Мясную вытяжку (1 : 4) подогревают для осаждения белков и пропускают через бумажный фильтр. Для облучения в пробирку из бесцветного стекла наливают 2 мл фильтрата. Люминесцентный анализ проводят в темной комнате Исследователь, наблюдающий свечение, должен быть в очках. К исследованию приступают после 10-минутного прогревания ртутно-кварцевой лампы прибора. Пробирку с мясным фильтратом помещают в поток ультрафиолетовых лучей (угол падения лучевого потока должен быть около 45°), после чего устанавливают спектральный состав и интенсивность свечения фильтрата.

Вытяжки из мяса здоровых животных светятся розовым или бледно-фиолетовым цветом, из мяса больных животных — зеленовато-голубым различной интенсивности.

Определение рН. В процессе созревания в мясе здоровых животных происходит снижение показателя концентрации водородных ионов. Так рН мышц животного при жизни более 7,2, уже через час после убоя рН мяса равно 6,2—6,3, а через сутки снижается до 5,6—5,8. В мясе больных, переутомленных или убитых в агонии животных такого резкого снижения рН не происходит.

Величина рН в мясе зависит от содержания углеводов в мышцах в момент убоя животного, а также от активности внутримышечных ферментов.

Определяют рН двумя способами: потенциометрическим и колориметрическим.

Потенциометрический способ. Исследование проводят по инструкции при потенциометре. Можно определять рН потенциометрическим хингидронным методом, непосредственно в исследуемом образце мяса. Для этого свежую поверхность разреза мяса посыпают хингидроном, вкалывают в мясо платиновый электрод и вкладывают конец агарового сифона; другой конец сифона погружают в сосуд с насыщенным раствором хлористого калия. В остальном определение рН так же, как и в мясной вытяжке.

Колориметрический способ. рН определяют при помощи стандартного набора одноцветных растворов и компаратора. Вначале определяют реакцию среды, что необходимо для выбора индикатора. Для этого мясную вытяжку наливают в фарфоровую чашечку и добавляют 1—2 капли универсального индикатора. Полученный цвет при добавлении индикатора сравнивают со шкалой цветных бумажек, имеющихся в наборе. Реакцию среды можно определять, добавляя к фильтрату 1—2 капли равной смеси 0,1%-ных спиртовых растворов нейтральрота и метиленовой синьки: вытяжка с кислой реакцией среды 40 окрасится в фиолетово-синий цвет, а с щелочной - в зеленый. После этого переходят к определению рН. В гнезда компаратора вставляют пробирки и заполняют их следующим образом: в первую и третью пробирки наливают 2 мл фильтрата и 5 мл дистиллированной воды; во вторую пробирку 2 мл фильтрата, 4 мл дистиллированной воды и 1 мл индикатора; в пятую пробирку — 7 мл дистиллированной воды; в четвертую и шестую пробирки — стандартные растворы из набора.

При кислой реакции среды берут индикатор паранитрофе-нол; при нейтральной или щелочной — метанитрофенол. Стандартные пробирки подбираются таким образом, чтобы цвет их был одинаков с цветом средней пробирки первого ряда. Цифра рН, указанная на пробирке стандартного ряда, соответствует рН исследуемой вытяжки. Если оттенок цвета жидкости в пробирке с испытуемым фильтратом занимает промежуточное положение между двумя стандартными пробирками, то берется среднее между показателями рН этих двух растворов.

В концентрированной мясной вытяжке (1: 4) из остывшего мяса здоровых животных рН обычно не превышает 6,2; при заболеваниях преимущественно с хроническим течением рН мяса равен 6,3—6,5; величина 6,6 и выше обнаруживается в мясе животных, убитых при тяжелых патологических процессах. В менее концентрированных мясных вытяжках (1 : 10) рН мяса здоровых животных может достигать величины 6,4—6,5; в мясе больных — 6,6 и выше.

Дата добавления: 2015-06-30; просмотров: 192; Нарушение авторских прав

Мы поможем в написании ваших работ!