Аудиторная работа

Лабораторная работа (цветные реакции, обнаруживающие белок и аминокислоты)

1. Биуретовая реакцияоткрывает в белке пептидную связь(-СО-NН-),образующуюся в результате взаимодействия карбоксильной и аминогруппы альфа-аминокислот при отнятия воды. Название реакции происходит от производного мочевины – биурета, имеющие группировки, характерные для белковой молекулы. (-СО- NН-).

Химизм реакции: при добавлении сернокислой меди в сильно основной раствор белка образуются комплексные соединения меди, окрашенные в красно-фиолетовый или сине-фиолетовый цвет.

Ход работы: к 5 каплям раствора белка добавить 3 капли 10%-ого раствора едкого натрия и 1 каплю 1%-ого раствора сернокислой меди, смешать – появляется сине-фиолетовое окрашивание.

2. Нингидриновая реакциявыявляет a-аминогруппы: растворы белка, a-аминокислот и пептидов при нагревании с нингидрином приобретают фиолетовое окрашивание.

Ход работы: К 5 каплям раствора белка добавить 5 капель 0,1% -ого раствора нингидрина, кипятить 1-2 мин – появляется розово-фиолетовое или сине-фиолетовое окрашивание.

3. Ксантопротеиновая реакцияоткрывает в белках циклические аминокислоты. Большинство растворов белков при нагревании с концентрированной азотной кислотой приобретают желтое окрашивание, переходящее в оранжевое при подщелачивании.

Химизм: Реакция обусловлена нитрованием бензольного кольца соответствующих аминокислот с образованием нитросоединений желтого цвета.

Ход работы: К 5 каплям раствора белка добавить 3 капли концентрированной азотной кислоты и осторожно кипятить. Появляющийся осадок белка окрашивается в желтый цвет. После охлаждения прилить по каплям 10%-ный раствор едкого натрия до появления оранжевого окрашивания.

4. Реакция Миллонаоткрывает в белках циклическую аминокислоту тирозин, имеющую фенольную группировку, которая, взаимодействуя с реактивом Миллона (смесь азотнокислых солей закиси и окиси ртути в концентрированной азотной кислоте), образует ртутную соль красного цвета. Белки, не содержащие тирозина, этой реакцией не обнаруживаются. При избытке реактива Миллона появление окраски (красного цвета) может быть замаскировано ксантопротеиновой реакцией за счет азотной кислоты.

Ход работы: К 5 каплям раствора белка прилить 3 капли реактива Миллона – появляется осадок белка, который при осторожном нагревании окрашивается в кирпично-красный цвет.

6. Реакция Фоляпозволяет обнаружить в белке аминокислоты (цистин и цистеин), содержащие непрочно связанную серу.

Химизм: при кипячении белка со щелочью цистин и цистеин теряют серу в виде сероводорода, который со свинцом образует черный или серый осадок сернистого свинца (реактив Фоля состоит из 5%-ого раствора уксуснокислого свинца и избытка 10%-ого раствора едкого натра).

Ход работы: К 5 каплям раствора белка прилить 5 капель реактива Фоля, нагреть до кипения и оставить на 1 или 2 мин – появляется бурый или черный осадок сернистого свинца.

После выполнения проб каждому студенту необходимо индивидуально проделать следующее: в пробе жидкости, полученной у преподавателя, установить наличие белка или аминокислот (при обнаружении аминокислот определить тип). Письменно аргументируйте результат исследования.

Дайте письменно обоснованные ответы на следующие вопросы:

1. Исследуемая биологическая жидкость при нагревании с нингидрином приобретает фиолетовое окрашивание. Содержатся ли в исследуемой жидкости белки?

2. Можно ли установить присутствие свободных аминокислот в растворе белка, располагая реактивами только для нингидриновой пробы?

3. Будет ли положительной биуретовая реакция с раствором белка после длительного кипячения в присутствии серной кислоты?

4. Будет ли положительной биуретовая реакция с раствором белка после кратковременного нагревания?

5. Выберите из представленных аминокислот протеиногенную:

а. R- CH(NH ₂ )-CH ₂ –CH₂ –COOH .б. R- CH ₂- CH (NH ₂ ) –CH₂ –COOH

в. R- CH ₂-CH ₂ –CH (NH ₂) –COOH

6. Определите суммарный заряд молекул аминокислот, представленных в таблице, при различных значениях рН и заполните таблицу:

Сравните Ваши ответы с эталонными ответами. Выявите с помощью лекций и учебника причину Ваших ошибок.

Дата добавления: 2014-10-14; просмотров: 687; Нарушение авторских прав

Мы поможем в написании ваших работ!