Студопедия

Главная страница Случайная лекция

Порталы:

БиологияВойнаГеографияИнформатикаИскусствоИсторияКультураЛингвистикаМатематикаМедицинаОхрана трудаПолитикаПравоПсихологияРелигияТехникаФизикаФилософияЭкономика






Аудиторная работа. 1. Высаливание белков сыворотки крови сульфатом аммонияможет использоваться для разделения альбуминов и глобулинов

Читайте также:
  1. II. Общее устройство, работа и управление ЭО-4124 с обратной лопатой.
  2. Microsoft Excel. Работа с макросами. Язык программирования Visual Basic for Application.
  3. Microsoft Excel. Работа с пакетом анализа. Построение простой регрессии
  4. Анализ процессов (определяем существующую в обществе повестку дня и соотносим с нею разработанные альтернативы). Устанавливаем клиентную группу.
  5. Аудиторная работа
  6. Аудиторная работа
  7. Аудиторная работа
  8. Аудиторная работа
  9. Аудиторная работа

Лабораторная работа

1. Высаливание белков сыворотки крови сульфатом аммонияможет использоваться для разделения альбуминов и глобулинов, так как глобулины осаждаются при 50%-ном насыщении сульфатом аммония, а альбумины – при 100%-ном насыщении.

Ход работы:В пробирку внести 2 мл сыворотки крови и прибавить столько же насыщенного раствора сульфата аммония. Образующийся осадок отфильтровать – на фильтре при этом останутся глобулины. К фильтрату добавить сухого тонко измельченного порошка сульфата аммония до насыщения. Образующийся при этом осадок, представленный альбуминами, отделить фильтрованием.

Высаливание сульфатом аммония обратимо. В этом можно убедиться, поместив фильтры с осадком белка в воду – происходит растворение осадка.

В протоколе укажите принцип метода высаливания

2. Количественное определение белка в биологической жидкостиосновано на реакции осаждения белка сульфосалициловой кислотой и определении мутности осадка (нефелометрическое определение).

Ход работы: А. Опытная проба – в пробирку внести 1,25 мл исследуемой жидкости и добавить до 5 мл раствора сульфосалициловой кислоты; экспонировать 5 мин; внести пробу после экспозиции в кювету (10мм) фотоэлектроколориметра и определить (против воды) плотность образовавшейся мути, используя оранжевый фильтр.

Б. Контрольная проба: внести в пробирку вместо сульфосалициловой кислоты 1,25 мл дистиллированной воды и далее провести все манипуляции опытной пробы.

Найти разницу между оптической плотностью опытной и контрольной проб и учесть результат по калибровочному графику.

Калибровочный график строится по результатам определения оптической плотности растворов альбумина с известной концентрацией при добавлении к ним сульфосалициловой кислоты: на оси абцисс – значения концентрации белка (в %), на оси ординат – значения оптической плотности (единица измерений экстинции).

 

Дайте обоснованные ответы:

1. Как узнать, осажден ли полностью белок из биологической жидкости после 50% насыщения ее сульфатом аммония?

Дополнительные сведения: жидкость после 50% насыщения сульфатом аммония и фильтрования прозрачна.

2. Как используя биуретовый метод определения белка и сульфат аммония, установить соотношение между альбуминами и глобулинами сыворотки крови?

3. Раствор белка кипятили 1,5 часа в присутствии серной кислоты. Будет ли биуретовая реакция на продукты положительной? Ответ аргументировать.

4. Запишите формулу пептида: ала-глу-асп-лиз-мет.

а. Определите суммарный заряд пептида при рН 7,0;

Как суммарный заряд влияет на растворимость?

б. в какой среде лежит ИЭТ данного пептида;

в. при каком значении рН будет наблюдаться наименьшая растворимость данного пептида?

5. Почему кислое молоко в отличие от свежего сворачивается (т.е. белок молока казеин выпадает в осадок). В свежем молоке молекулы казеина имеют отрицательный заряд.

6. Почему протамины и гистоны коагулируют при нагревании в сильно щелочной среде?

7. Определите направление движения в электрическом поле двух пептидов при рН 7,0 ( при электрофорезе – к катоду или аноду):

а) вал- глу- ала б. лей-асп-арг

8. Подберите к методу разделения и очистки белков их соответствующие свойства, на которых основан данный метод:



1. Гель-фильтрация; А. Различия по величине заряда

2. Электрофорез; Б. Различие по молекул. массе

3. Афинная хроматография; В. Оба

4.Ионнообменная хроматография Г. Ни одно из свойств

9. Денатурация белка сопровождается (отметьте правильные ответы):

а. Разрывом ковалентных связей

б. Изменением пространственной конформации белка

в. Уменьшением растворимости белка

г. Нарушением связывания белка с лигандом

д. Нарушением первичной структуры белка

10. Белки денатурируют в клетке в результате (выберите правильгные ответы):

а. Повышении температуры

б. Изменения рН

в. Действия протеолитических ферментов

г. Разрыва слабых связей, поддерживающих конформацию белка

д. Синтеза шаперонов

 

Сравните Ваши ответы с эталонными ответами и рассчитайте % правильных ответов. Выявите с помощью лекций и учебника причину Ваших ошибок.

 


<== предыдущая страница | следующая страница ==>
Занятие 3. Структура и физико-химические свойства белков. Высаливание белков | Занятие 4. Химия сложных белков. Анализ химического состава нуклеопротеидов

Дата добавления: 2014-10-14; просмотров: 764; Нарушение авторских прав


lektsiopedia.org - Лекциопедия - 2013 год. | Страница сгенерирована за: 0.008 сек.