Аудиторная работа. 1. Высаливание белков сыворотки крови сульфатом аммонияможет использоваться для разделения альбуминов и глобулинов

Лабораторная работа

1. Высаливание белков сыворотки крови сульфатом аммонияможет использоваться для разделения альбуминов и глобулинов, так как глобулины осаждаются при 50%-ном насыщении сульфатом аммония, а альбумины – при 100%-ном насыщении.

Ход работы:В пробирку внести 2 мл сыворотки крови и прибавить столько же насыщенного раствора сульфата аммония. Образующийся осадок отфильтровать – на фильтре при этом останутся глобулины. К фильтрату добавить сухого тонко измельченного порошка сульфата аммония до насыщения. Образующийся при этом осадок, представленный альбуминами, отделить фильтрованием.

Высаливание сульфатом аммония обратимо. В этом можно убедиться, поместив фильтры с осадком белка в воду – происходит растворение осадка.

В протоколе укажите принцип метода высаливания

2. Количественное определение белка в биологической жидкостиосновано на реакции осаждения белка сульфосалициловой кислотой и определении мутности осадка (нефелометрическое определение).

Ход работы: А. Опытная проба – в пробирку внести 1,25 мл исследуемой жидкости и добавить до 5 мл раствора сульфосалициловой кислоты; экспонировать 5 мин; внести пробу после экспозиции в кювету (10мм) фотоэлектроколориметра и определить (против воды) плотность образовавшейся мути, используя оранжевый фильтр.

Б. Контрольная проба: внести в пробирку вместо сульфосалициловой кислоты 1,25 мл дистиллированной воды и далее провести все манипуляции опытной пробы.

Найти разницу между оптической плотностью опытной и контрольной проб и учесть результат по калибровочному графику.

Калибровочный график строится по результатам определения оптической плотности растворов альбумина с известной концентрацией при добавлении к ним сульфосалициловой кислоты: на оси абцисс – значения концентрации белка (в %), на оси ординат – значения оптической плотности (единица измерений экстинции).

Дайте обоснованные ответы:

1. Как узнать, осажден ли полностью белок из биологической жидкости после 50% насыщения ее сульфатом аммония?

Дополнительные сведения: жидкость после 50% насыщения сульфатом аммония и фильтрования прозрачна.

2. Как используя биуретовый метод определения белка и сульфат аммония, установить соотношение между альбуминами и глобулинами сыворотки крови?

3. Раствор белка кипятили 1,5 часа в присутствии серной кислоты. Будет ли биуретовая реакция на продукты положительной? Ответ аргументировать.

4. Запишите формулу пептида: ала-глу-асп-лиз-мет.

а. Определите суммарный заряд пептида при рН 7,0;

Как суммарный заряд влияет на растворимость?

б. в какой среде лежит ИЭТ данного пептида;

в. при каком значении рН будет наблюдаться наименьшая растворимость данного пептида?

5. Почему кислое молоко в отличие от свежего сворачивается (т.е. белок молока казеин выпадает в осадок). В свежем молоке молекулы казеина имеют отрицательный заряд.

6. Почему протамины и гистоны коагулируют при нагревании в сильно щелочной среде?

7. Определите направление движения в электрическом поле двух пептидов при рН 7,0 ( при электрофорезе – к катоду или аноду):

а) вал- глу- ала б. лей-асп-арг

8. Подберите к методу разделения и очистки белков их соответствующие свойства, на которых основан данный метод:

1. Гель-фильтрация; А. Различия по величине заряда

2. Электрофорез; Б. Различие по молекул. массе

3. Афинная хроматография; В. Оба

4.Ионнообменная хроматография Г. Ни одно из свойств

9. Денатурация белка сопровождается (отметьте правильные ответы):

а. Разрывом ковалентных связей

б. Изменением пространственной конформации белка

в. Уменьшением растворимости белка

г. Нарушением связывания белка с лигандом

д. Нарушением первичной структуры белка

10. Белки денатурируют в клетке в результате (выберите правильгные ответы):

а. Повышении температуры

б. Изменения рН

в. Действия протеолитических ферментов

г. Разрыва слабых связей, поддерживающих конформацию белка

д. Синтеза шаперонов

Сравните Ваши ответы с эталонными ответами и рассчитайте % правильных ответов. Выявите с помощью лекций и учебника причину Ваших ошибок.

Дата добавления: 2014-10-14; просмотров: 764; Нарушение авторских прав

Мы поможем в написании ваших работ!