Главная страница Случайная лекция Мы поможем в написании ваших работ! Порталы: БиологияВойнаГеографияИнформатикаИскусствоИсторияКультураЛингвистикаМатематикаМедицинаОхрана трудаПолитикаПравоПсихологияРелигияТехникаФизикаФилософияЭкономика Мы поможем в написании ваших работ! |
Аудиторная работа. 1. Высаливание белков сыворотки крови сульфатом аммонияможет использоваться для разделения альбуминов и глобулиновЛабораторная работа 1. Высаливание белков сыворотки крови сульфатом аммонияможет использоваться для разделения альбуминов и глобулинов, так как глобулины осаждаются при 50%-ном насыщении сульфатом аммония, а альбумины – при 100%-ном насыщении. Ход работы:В пробирку внести 2 мл сыворотки крови и прибавить столько же насыщенного раствора сульфата аммония. Образующийся осадок отфильтровать – на фильтре при этом останутся глобулины. К фильтрату добавить сухого тонко измельченного порошка сульфата аммония до насыщения. Образующийся при этом осадок, представленный альбуминами, отделить фильтрованием. Высаливание сульфатом аммония обратимо. В этом можно убедиться, поместив фильтры с осадком белка в воду – происходит растворение осадка. В протоколе укажите принцип метода высаливания 2. Количественное определение белка в биологической жидкостиосновано на реакции осаждения белка сульфосалициловой кислотой и определении мутности осадка (нефелометрическое определение). Ход работы: А. Опытная проба – в пробирку внести 1,25 мл исследуемой жидкости и добавить до 5 мл раствора сульфосалициловой кислоты; экспонировать 5 мин; внести пробу после экспозиции в кювету (10мм) фотоэлектроколориметра и определить (против воды) плотность образовавшейся мути, используя оранжевый фильтр. Б. Контрольная проба: внести в пробирку вместо сульфосалициловой кислоты 1,25 мл дистиллированной воды и далее провести все манипуляции опытной пробы. Найти разницу между оптической плотностью опытной и контрольной проб и учесть результат по калибровочному графику. Калибровочный график строится по результатам определения оптической плотности растворов альбумина с известной концентрацией при добавлении к ним сульфосалициловой кислоты: на оси абцисс – значения концентрации белка (в %), на оси ординат – значения оптической плотности (единица измерений экстинции).
Дайте обоснованные ответы: 1. Как узнать, осажден ли полностью белок из биологической жидкости после 50% насыщения ее сульфатом аммония? Дополнительные сведения: жидкость после 50% насыщения сульфатом аммония и фильтрования прозрачна. 2. Как используя биуретовый метод определения белка и сульфат аммония, установить соотношение между альбуминами и глобулинами сыворотки крови? 3. Раствор белка кипятили 1,5 часа в присутствии серной кислоты. Будет ли биуретовая реакция на продукты положительной? Ответ аргументировать. 4. Запишите формулу пептида: ала-глу-асп-лиз-мет. а. Определите суммарный заряд пептида при рН 7,0; Как суммарный заряд влияет на растворимость? б. в какой среде лежит ИЭТ данного пептида; в. при каком значении рН будет наблюдаться наименьшая растворимость данного пептида? 5. Почему кислое молоко в отличие от свежего сворачивается (т.е. белок молока казеин выпадает в осадок). В свежем молоке молекулы казеина имеют отрицательный заряд. 6. Почему протамины и гистоны коагулируют при нагревании в сильно щелочной среде? 7. Определите направление движения в электрическом поле двух пептидов при рН 7,0 ( при электрофорезе – к катоду или аноду): а) вал- глу- ала б. лей-асп-арг 8. Подберите к методу разделения и очистки белков их соответствующие свойства, на которых основан данный метод: 1. Гель-фильтрация; А. Различия по величине заряда 2. Электрофорез; Б. Различие по молекул. массе 3. Афинная хроматография; В. Оба 4.Ионнообменная хроматография Г. Ни одно из свойств 9. Денатурация белка сопровождается (отметьте правильные ответы): а. Разрывом ковалентных связей б. Изменением пространственной конформации белка в. Уменьшением растворимости белка г. Нарушением связывания белка с лигандом д. Нарушением первичной структуры белка 10. Белки денатурируют в клетке в результате (выберите правильгные ответы): а. Повышении температуры б. Изменения рН в. Действия протеолитических ферментов г. Разрыва слабых связей, поддерживающих конформацию белка д. Синтеза шаперонов
Сравните Ваши ответы с эталонными ответами и рассчитайте % правильных ответов. Выявите с помощью лекций и учебника причину Ваших ошибок.
Дата добавления: 2014-10-14; просмотров: 764; Нарушение авторских прав Мы поможем в написании ваших работ! |