Влияние рН на активность амилазы слюны

Зависимость активности ферментов от концентрации Н-ионов можно проследить в опытах с амилазой слюны, рН-оптимум которой равен 6,8.

Ход работы: В три пробирки внести по 3 мл буферного раствора с рН 1,2; 6,8; 10,0. Добавить в каждую пробирку по 1 мл слюны, разведенной водой в 10 раз, и по 2 мл 0,5%-ного раствора крахмала. Смешать и инкубировать при 37^о С 10мин. Подкислить содержимое второй и третьей пробирок добавлением соответственно 1 и 2 мл 0,1 н соляной кислоты ( реакция на крахмал положительна только в кислой среде) и провести пробу Люголя. Сравнить интенсивность распада крахмала зависимости от рН. Построить график зависимости скорости реакции от рН среды. Определить рН-оптимум амилазы слюны.

3. Специфичность действия ферментов.Специфическими субстратами амилазы слюны являются крахмал и гликоген, расщепление которых амилаза катализирует. Образующаяся при расщеплении крахмала мальтоза обнаруживается пробой Троммера.

Используя в качестве субстрата сахарозу, можно убедиться в том, что амилаза не катализирует распад сахарозы.

Ход работы: В одну пробирку внести 2 мл 0,5%-ого раствора крахмала, в другую – 2 мл 2%-ного раствора сахарозы. Добавить в обе пробирки по 2 мл слюны, разведенной в 10 раз водой, смешать и оставить на 10 мин при 37^о С.

Провести с содержимым обеих пробирок пробу Троммера. Она окажется положительной при наличии редуцирующего углевода – мальтозы (пробирка первая) и отрицательной в присутствии редуцирующего углевода (пробирка вторая).

Дайте обоснованные ответы на следующее:

1.Какой из предложенных ниже способов можно использовать для определения активности амилазы слюны:

а. по определению остаточной концентрации крахмала;

б. по нарастанию количества мальтозы;

в. по изменению рН среды в ходе реакции.

2. Скорость взаимодействия А+Б увеличилась после добавления вещества К в три раза. В качестве конечных продуктов обнаруживаются соединения АК и БК. Является ли вещество Ккатализатором?

3.Построить график зависимости V от [S] по экспериментальным данным: [S] - 1, 2, 4,6,10,15,17,18,22 мМоль/л; соответственно V равна: 0,1; 0,2; 0,4; 0,6; 1,0; 1.5; 1,6; 1,6; 1,6

Определить с помощью графика константу Михаэлиса. Как по константе Михаэлиса судят о степени сродства энзима к субстрату?

4. Фермент катализирует реакцию расщепления пептидных связей в молекуле белка. Назовите класс и подкласс фермента.

5. Фермент катализирует отщепление карбоксильной группы в виде СО₂ от молекулы аминокислоты. Назовите класс и подкласс фермента.

6. Фермент катализирует перенос аминогруппы от аминокислоты на кетокислоту. Назовите класс и подкласс фермента.

7. Фермент катализирует превращение молекулы глюкозы в молекулу фруктозы. Назовите класс фермента.

8. При определении активности фермента получены данные, представленные в таблице:

Построить график зависимости активности фермента от рН, высказать предположение о том, какой фермент находится в растворе, определить принадлежность фермента к классу и группе соответственно высказанному предположению.

9. Субстрат исследуемого фермента образует белый осадок при нагревании, дает положительную биуретовую реакцию. После длительной инкубации с ферментом при разных значениях рН интенсивность биуретовой реакции снизилась, увеличилось число свободных аминогрупп, усилилась положительная реакция с нингидрином. Особенно заметными эти изменения были при рН 8,0-8,5.

Назовите субстрат, фермент, определите принадлежность фермента к классу и группе. Почему увеличилось число свободных аминогрупп?

Сравните Ваши ответы с эталонными ответами и рассчитайте % правильных ответов. Выявите с помощью лекций и учебника причину Ваших ошибок.

Дата добавления: 2014-10-14; просмотров: 740; Нарушение авторских прав

Мы поможем в написании ваших работ!