Культивирование аэробов и факультативных анаэробов

Пассивная аэрация — это культивирование микробов на плотных или жидких средах в сосудах, закрытых ватными или ватно-марлевыми пробками, или в чашках Петри. При такой аэрации микробы потребляют кислород, растворенный в среде, находящийся в сосуде над средой и поступающий через пробку. Пассивно аэрируемые культуры можно выращивать на поверхности или в тонком слое питательной среды, в которую проникает кислород.

Активная аэрация применяется при глубинном культивировании микробов, когда их выращивают в больших объемах жидкой среды. Чтобы обеспечить достаточное снабжение кислородом таких культур, их помешают в специальные качалки, в которых происходит постоянное перемешивание культуры и обеспечивается соприкосновение ее с воздухом.

При глубинном культивировании применяют также продувание воздуха через культуру. Это необходимо при культивировании в больших объемах жидкости, достигающих десятков и сотен тысяч литров. Для такого культивирования пользуются специальными приборами, называемыми ферментерами или реакторами.

Количество подаваемого в среду кислорода зависит от вида микроба и фазы его роста.

Культивирование анаэробов

Культивирование анаэробов сложнее, чем аэробов, так как их необходимо изолировать от кислорода воздуха т. е. нужно удалить кислород из питательной среды и хм» окружающего ее пространства. Для этого предложены голо физические, химические и биологические способы.

Физические способы. а) Культивирование в анаэростате. Анаэростат — это герметически закрывающийся тер­мостат со специальным устройством для откачивания воздуха. Культуры помещают в аппарат, герметически закрывают дверцу, с помощью вакуум-насоса откачивают из аппарата воздух и производят культивирование в те­чение определенного времени.

Портативный анаэростат (переносный) - это неболь­шой металлческий цилиндр с герметически закрываю­щейся крышкой и краном для отсасывания воздуха. По­севы устанавливают в прибор, создают вакуум и ставят прибор в термостат.

Выращивать в анаэростатах культуры можно только на плотных средах, так как жидкие среды при создании вакуума будут выплескиваться из сосудов.

б) Культивирование в атмосфере инертного газа (например, азота) или водорода, замещающего воздух в анаэростате.

в) Выращивание в высоком столбике агара с глюкозой.

г) Механическая защита от кислорода – способ Виньяль-Вейона. Посев производят в пробирку с расплавленной и остуженной до температуры 42ºС агаровой средой. Содержимое пробирки насасывают в пастеровскую пипетку, заполняя ее до верха и оба конца пипетки запаивают. Пипетки помещают в пробирки с ватой на дне и переносят в термостат. После инкубации в толще агара можно наблюдать изолированные колонии. Этот метод используют для выделения чистых культур анаэробов.

д) Добавление в среду редуцирующих (окисляющих веществ. Чаще всего пользуются средой Тароцци. В качестве редуцирующих веществ среда содержит 0,5% глюкозы и кусочки свежих органов животных или мясного фарша. Перед посевом среду кипятят 20 минут на водяной бане для удаления растворенного в ней кислород Посев производят на неостывшую среду (при температуре 42-45°), пока она вновь не насытилась кислородом. После посева в пробирку наливают стерильное вазелиновое масло слоем 1-1,5 см. Оно препятствует попаданию кислорода воздуха.

Химический метод. На дно эксикатора наливают щелочной раствор пирогалола или гидросульфита натрия (они жадно поглощают кислород). В эксикатор помещают пробирки или чашки с культурами, закрывают герметически крышку и ставят в термостат.

Биологический метод - совместное выращивание культур анаэробов и аэробов на одной чашке Петри. В чашку наливают толстым слоем агар и добавляют 5% крови. По диаметру чашки делают в среде желобок, чтобы культуры не смешивались. На одну половину среды засевают культуру аэроба, на другую – анаэроба. Края чашки заливают парафином. Чашки помещают в термостат. Сначала происходит рост аэробов. После того, как они поглотят кислород, находящийся в чашке, начнут расти анаэробы.

Необходимо подчеркнуть разницу между специальными и элективными питательными средами. Указать, что на специальных выращивают микробов, не способных расти на простых средах. На элективных средах растут те микробы, для которых они предназначены.

Преподаватель демонстрирует ингредиенты питательных сред, готовые питательные среды в пробирках и чашках.

Самостоятельная работа студентов

1. Познакомиться с приготовлением простых и сложных сред.
2. Познакомиться с набором готовых питательных сред.
3. Изучить набор сухих питательных сред, записать их названия в тетрадь.

Дата добавления: 2014-11-01; просмотров: 973; Нарушение авторских прав

Мы поможем в написании ваших работ!