Студопедия

Главная страница Случайная лекция


Мы поможем в написании ваших работ!

Порталы:

БиологияВойнаГеографияИнформатикаИскусствоИсторияКультураЛингвистикаМатематикаМедицинаОхрана трудаПолитикаПравоПсихологияРелигияТехникаФизикаФилософияЭкономика



Мы поможем в написании ваших работ!




Электронная микроскопия биологических объектов

Читайте также:
  1. Атомно-силовая микроскопия.
  2. Ветеринарных биологических препаратов
  3. Виды несохранности грузов и буксируемых объектов. Порядок их оформления и расследования.
  4. Выравнивание объектов. При создании презентации важно, чтобы объекты были выровнены. Слайд с выровненными объектами выглядит значительно лучше, чем слайд без выравнивания.
  5. Геодезические работы при проектировании и строительстве мелиоративных объектов.
  6. Дезактивация загрязненных объектов.
  7. Единство судьбы земельных участков и прочно связанных с ними объектов.
  8. Инженерные мероприятия по восстановлению боеспособности войск и ликвидации последствий применения противником ОМП, разрушений радиационно и химически опасных объектов.
  9. Кокрановская электронная бибилиотека
  10. Криоэлектронная микроскопия.

 

Попытки рассмотреть в электронном микроскопе биологические объекты натолкнулись на ряд трудностей, для преодоления которых пришлось разрабатывать новые методы обработки биологических образцов. Живые клетки с помощью электронного микроскопа не исследуются. Очевидная причина - достаточно высокий вакуум в колонне, живые клетки, содержащие значительное количество воды, мгновенно повреждаются и гибнут при помещении их в вакуум и при облучении интенсивным потоком электронов.

 

Требования к образцу для электронно-микроскопического исследования: оптимальная толщина, неоднородность химического состава и присутствие тяжелых элементов; устойчивость к воздействию вакуума, температуры и электронного луча.

 

Особенности биологических объектов, определяющие характер подготовки материала для электронно-микроскопического исследования.

Химический состав биологических объектов. Сохранение структуры с помощью стабилизации химических связей (фиксация).

Способы соблюдения требования оптимальной толщины. Опорные пленки. Ультратонкие срезы.

 

Способы повышения контраста изображения (контрастирование солями тяжелых металлов, напыление). Изучение макромолекул с использованием метода напыления (оттенения) металлами (платина, палладий, золото). Недостатки метода: дает информацию только о внешнем виде объекта, увеличивает размеры объекта на толщину напыленного слоя (1—15 А).

 

Изучение нуклеиновых кислот методом напыления. Гетеродуплексный анализ.

 

Метод негативного контрастирования. Уранилацетат, фосфорно-вольфрамовая кислота. Области применения (быстрая диагностика (идентификация) вирусов, изучение вирусных суспензий, определение концентрации вирионов в суспензии (физический титр). Индикация бактериальных клеток. Достоинства метода: позволяет изучить форму и размеры вирусных частиц; изучить строение поверхности вирусных и частиц и бактериальных клеток.

Требования к препаратам: концентрация не ниже 10 6 - 10 7 частиц в мл; чистота.

 

Основные этапы исследования методом негативного контрастирования:

подготовка сеточек с подложкой; нанесение суспензии вируса (бактерий) на сеточку, экспозиция; экспозиция сеточки с контрастирующим веществом (уранилацетат, фосфорно-вольфрамовая кислота и др.); просмотр сеточки в электронном микроскопе.

 

Формирование изображения при негативном и позитивном контрастировании.

 

Метод криофрактографии (криоскалывание). Особенность метода – приготовление препаратов без химической фиксации. Этапы приготовления образцов (реплик): замораживание жидким азотом, приготовление скола и возгонка воды в вакууме, напыление углеродом и металлом, обработка кислотой. Этот метод сыграл важную роль в электронно-микроскопическом изучении клетки и в понимании её строения. Именно с помощью криофрактографии было показано, что альдегидная фиксация обеспечивает адекватное, соответствующее нативной (замороженной) клетке, сохранение клеточных структур.


<== предыдущая страница | следующая страница ==>
Трансмиссионная (просвечивающая) и растровая (сканирующая) электронная микроскопия | Метод ультратонких срезов

Дата добавления: 2014-04-24; просмотров: 710; Нарушение авторских прав




Мы поможем в написании ваших работ!
lektsiopedia.org - Лекциопедия - 2013 год. | Страница сгенерирована за: 0.003 сек.