Определение общего количества клеток

Аппаратура и реактивы: см. П.5.1

Порядок выполнения работы

Для подсчета количества дрожжевых клеток пользуются счетной камерой Горяева, представляющей собой толстое предметное стекло, с нанесенными на него поперечными прорезями, которые образуют три поперечно расположенные площадки.. Средняя площадка опущена на 0,1 мм относительно двух других площадок, на которые накладывают специальное шлифовальное покровное стекло размером 18х18 мм, что обеспечивает создание камеры для дрожжевой суспензии.

Толстое покровное стекло покрывают шлифовальным стеклом. Камеру заполняют дрожжевой суспензией разведенной 1:10 (в цилиндр на 10 мл приливают 1 мм дрожжевой суспензии и 9 мм дистиллированной воды). Камеру Горяева помещают на предметный столик микроскопа, настраивают свет и видимость счетной камеры. Количество клеток определяют в соответствии с формулой:

D=АхК1хК2хВ,

где D- количество клеток определяют в 1 мл суспензии;

А – количество клеток в 80 малых квадратах, шт;

К1 – коэффициент глубины камеры (при глубине камеры 0,1 мм К1=10, при глубине камеры 0,2 мм К1=5);

К2 – коэффициент пересчета объема, 1/ мл (К2=5000 1/мл).

При подсчете дрожжевых клеток в камере Горяева с глубиной 0,1 мм и десятикратным разбавлением дрожжевой суспензии D=5х10⁴хВ.

5.4 Подсчет процентного количества мертвых клеток в дрожжевой суспензии

Аппаратура и реактивы: см. П.5.1

Порядок выполнения работы

В хороших семенных дрожжах должно содержаться не более 10% мертвых клеток. Высокое содержание мертвых клеток вызывает замедление брожения, способствует развитию посторонней микрофлоры и автолиз дрожжей.

Для определения количества мертвых клеток на предметное стекло наносят по одной капле не фильтрованной дрожжевой суспензии и раствора метиленовой сини (1:5000), окращивающей мертвые клетки в синий цвет. Каплю закрывают покровным стеклом, излишек жидкости собирают листком фильтровальной бумаги и через 2 минуты микроскопируют. В поле зрения микроскопа считают общее количество дрожжевых клеток, затем только синие, после чего препарат передвигают и подсчет ведут в новом поле зрения. Таким образом подсчитывают общее количество клеток в пяти полях зрения.. После подсчета вычисляют количество мертвых клеток в процентах.

В зрелых дрожжах количество мертвых клеток не должно превышать 1%.

Пример.

Всего в пяти полях зрения обнаружено 43+45+39+42+40=209 дрожжевых клеток. В т.ч. окрашенных в синий цвет 1+0+0+0+1=2. Процентное количество мертвых клеток составляет 2х100/209=0,96 (%).

5.5 Определение содержания гликогена в дрожжевых клетках

Аппаратура и реактивы: см. П.5.1

Порядок выполнения работы

При нормальной технологии в дрожжах накапливается гликоген, когда 2/3 сахара сусла сброжены и дрожжи пригодны для использования в производстве.

Для определения количества гликогена в дрожжевых клетках на предметное стекло наносят каплю нефильтрованной дрожжевой суспензии и 2 капли 0,5%-ного раствора йода, каплю смешивают, накрывают покровным стеклом, отбирают излишек жидкости листком фильтровальной бумаги и микроскопируют. При отношении дрожжевой суспензии и раствора йода 1:2 через 2-3 минуты клетки окрашиваются в светло-желтый цвет, а гликоген – в коричневый. У зрелых дрожжей гликоген занимает от 1/3 до 2/3 клеток.

Дата добавления: 2014-11-08; просмотров: 716; Нарушение авторских прав

Мы поможем в написании ваших работ!