ДИАГНОСТИКА

ИБ трудно выявляемая инфекция, которая распространяется незаметно, маскируется другими болезнями и физиологическими нарушениями и лишь при типичном течении срав­нительно легко диагностируется по клиническим и патологоанатомическим признакам. Вне­запное появление болезни, сопровождающейся массовыми водянистыми поносами, высокой заболеваемостью, быстрым распространением и переболеванием в течение 5-7 дн и зубча­той кривой смертности, дают основание заподозрить наличие ИБ в хозяйстве. Подтвержде­нием диагноза может быть обнаружение характерных изменений в фабрициевой сумке. На ранней стадии или при субклиническом течении необходимы лабораторные исследования. Идентификацию вируса проводят с помощью РН и ИФА в модификации, соответст­вующей цели исследования и на соответствующих тест-системах. Наличие вируса в мазках из фабрициевой сумки определяют с помощью иммунопероксидазного окрашивания в при­сутствии авидин-биотинпероксидазного комплекса с использованием монАТ вирусу ВК70. Этот тест наиболее быстрый и высокоспецифичный.

Экспресс-диагностика. В настоящее время методы экспресс-диагностики детально не разработаны и не узаконены. Имеются сообщения о возможности применения в качестве та­ковых непрямого варианта ИФА и ИФ. Разработана схема постановки ПЦР, осущест­влен подбор вирусспецифических праймеров.

Выделение вируса. Успех выделения вируса зависит от срока после заражения и воз­раста инфицированной птицы. Выделение вируса обычно успешно до 14 дн после зараже­ния, а РДП и ИФ - до 3-5-го дня после заражения, эти реакции и более надежны, если ста­вятся с бурсальной тканью. Вирус ИБ обнаруживается в мышечном желудке, 12-перстной кишке и почках через 12 ч, а в селезенке и бурсе через 24 ч после заражения цыплят per os. Наилучшим сроком выделения вируса из пораженной бурсы является период - 4-8 дн. Глав­ная система репликации вируса - это лимфоциты, макрофаги и ретикулярные клетки бурсы, а также лимфоидные клетки слепой кишки.

Взятие и подготовка материала. Для лабораторных исследований от павшей или уби­той птицы берут фабрициеву сумку, печень, селезенку, почки. Пробы отбирают при появ­лении первых клинических признаков болезни (в течение первых 7 дн). Через неделю после начала болезни вирус практически выделить не удается. Материал пересылают в лабораторию в термосе со льдом. Из кусочков патматериала готовят 10%-уею суспензию на изото­ническом р-ре NaCl, центрифугируют 15 мин при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость, после добавления антибиотиков (пенициллин 1000 ЕД/мл и стрептомицин 100 мг/мл), вы­держивают в холодильнике при 4°С 6-12 ч и используют для заражения КЭ, культур клеток и восприимчивой птицы.

Заражение куриных эмбрионов. Используют 10-11-дн SPF-эмбрионы или эмбрионы из хозяйств, благополучных по инфекционным заболеваниям КЭ заражают на ХАО обще­принятым способом, инкубируют 10 дн, ежедневно овоскопируют В первые 24 ч после за­ражения гибель их считается неспецифической. Погибшие КЭ вскрывают в день гибели по­сле охлаждения при 4°С в течение 2-3 ч, а живые - на 10-й день инкубации, также после ох­лаждения. При наличии вируса КЭ гибнут на 3-7 день после заражения с характерными из­менениями. На 3-й день после заражения отмечают гиперемию и точечные кровоизлияния на коже в области головы и конечностей, иногда незначительные утолщения и помутнение ХАО. На 4-5-й день появляются отеки подкожной клетчатки в области головы и брюшной стенки зародыша, многие эмбрионы отстают в развитии. Печень у них увеличена, желтова­того цвета, с зеленовато-белыми очажками различной формы на поверхности. Селезенка увеличена, бледная, с некротическими очажками величиной с просяное зерно. Сердечная мышца бледная, фабрициева сумка без видимых изменений.

Заражение культуры клеток.Для изоляции вируса используют 24-48-4 культуры ФЭК Срок наступления ЦПД зависит от дозы вируса и числа пассажей. При первичном его выделении специфические изменения обычно наблюдаются после 2-3 пассажей вируссодержащего материала. ЦПД проявляется через 49-72 ч после инфицирования клеток и характе­ризуется образованием в монослое пустот, вакуолизацией и округлением клеток, в дальней­шем цитолизом и пикнозом ядер, образованием клеточных конгломератов, соединенных цитоплазматическими тяжами. Специфичность ЦПИ подтверждается заражением КЭ и поста­новкой РН. Рекомендуется использовать для этого линию клеток лейкозных опухолей -LSCE-BK3. Изоляты вируса в культуре ФЭК или клетках почки цыплят обычно проверяют по следующим параметрам: ЦПД, терморезистентность, устойчивость к хлороформу, тип нуклеиновой кислоты, отсутствие внутриклеточных включений, отрицательная гемагглютинация, АГ тождественность референтным штаммам вируса

Заражение цыплят. Биопробу на цыплятах ставят с целью выделения вируса, изучения его патогенности, а также экспериментального воспроизведения заболевания. Заражают цы­плят 21-25-дн возраста, не имеющих AT к вирусу. Исследуемый материал вводят интрана-зально в дозе 0,5 мл, на конъюнктиву, в фабрициеву сумку или per os 10-15 цыплятам, за которыми наблюдают 15 дн. Результаты оценивают учитывая клиническое проявление бо­лезни, патологоанатомические изменения, наличие специфических AT в сыворотке крови. Наиболее восприимчивы к вирусу ИБ SPF-цыплята 20-сут возраста и 40-сут цыплята из промышленных интактных к ИБ стад. Установлено, что взрослые SPF-куры болеют ИБ, хо­тя клинические признаки у них менее выражены. Для биопробы используют гомогенезированную ткань бурсы Фабрициуса. Клинические симптомы появляются на 3-й день, а на 4-й наблюдается обширное поражение бурсы. Поражение бурсы проявляется через 1 сут после заражения и характеризуется исчезновением небольших зон лимфоцитов, которые состав­ляют сетчатую структуру фолликулов. Через 1-5 дн после заражения появляются гетерофилы, пикнотический дебрис и множество ретикулярных клеток, заменяющих новые быстро исчезающие лимфоциты. В селезенке наблюдается гиперплазия ретикулоэндотелиальных клеток. В миндалинах слепой кишки отсутствуют фолликулы и лимфоциты. В почках появляются большие цилиндры гомогенного инфильтрированного материала. При инокуляции слабовирулентного вируса ИБ симптомы болезни и видимые патологоанатомические изме­нения в органах и тканях могут и не развиваться. В этом случае результаты биопробы оце­нивают по обнаружению вирусспецифического АГ и AT в РН и РДП.

Дата добавления: 2014-03-03; просмотров: 509; Нарушение авторских прав

Мы поможем в написании ваших работ!