Правила работы в микробиологической лаборатории

Читайте также:

Staphylococcus aureus Escherichia coli

Окраска метиленовым синим Окраска фуксином

ПРЕПАРАТ №3

Streptococcus pyogenes

Окраска метиленовым синим

Правила работы в микробиологической лаборатории

1. Работа в микробиологической лаборатории производится с заразным материалом, что требует соблюдения строгой дисциплины в работе.

2. В лаборатории студенты должны находиться в халатах и шапочках.

3. При выполнении практического задания студенты обязаны тщательно выполнять все указания преподавателя.

4. Материал для работы принимается дежурным по группе у лаборанта кафедры перед началом занятия.

5. В конце занятия весь материал возвращается на стол преподавателя под контролем дежурного, который сдает его лаборанту.

6. При выполнении практического задания на столе не должно быть никаких посторонних предметов.

7. Каждый студент получает для работы микроскоп, который закрепляется за ним на время работы на кафедре. Студенты отвечают за сохранность микроскопа.

8. Если студент случайно разобьет пробирку с микробами, разольет или разбрызгает заразный материал, он обязан сообщить об этом преподавателю и вместе с ним выполнить мероприятия по ликвидации последствий аварии.

9. В лаборатории категорически запрещается принимать пищу.

10. В конце занятия студент обязан:

- привести в порядок свое рабочее место;

- сдать весь материал;

- вымыть руки;

- представить альбом с зарисовками и протокол для подписи преподавателю.

Только после этого занятия считаются законченными.

I. Этапы приготовления мазков

1. Приготовление мазка из агаровой культуры

На середину обезжиренного предметного стекла нанести петлей каплю физиологического раствора.
Внести стерильной петлей в каплю физиологического раствора агаровую культуру.
Равномерно распределить культуру на предметном стекле в виде круга диаметром 1-1,5 см.
Простерилизовать петлю в пламени.
Высушить мазок при комнатной температуре или для ускорения – над пламенем спиртовки.
Зафиксировать мазок в пламени.
Окрасить мазок.
Промыть водой.
Просушить мазок фильтрованной бумагой.
Нанести на мазок каплю иммерсионного масла.
Выполнить микроскопию мазка.

2. Приготовление мазка из бульонной культуры

На середину обезжиренного предметного стекла нанести стерильной петлей или стерильной пастеровской пипеткой каплю бульонной культуры и равномерно распределить в виде мазка диаметром 1-1,5 см.
Остальные этапы те же.

II. Правила работы с иммерсионной системой микроскопа

1. Поднять конденсор до уровня предметного столика и открыть диафрагму.

2. Глядя сбоку в верхнюю линзу конденсора и вращая зеркало, найти изображение источника света.

3. Установить иммерсионный объектив.

4. На предметный столик поместить препарат с каплей иммерсионного масла и закрепить препарат клеммами.

5. Под контролем глаза макровинтом опустить тубус до соприкосновения линзы объектива с каплей масла на препарате. Очень осторожно погрузить под контролем глаза линзу в масло, не доводя до соприкосновения со стеклом.

6. Глядя в окуляр, макровинтом медленно поднимать тубус до появления изображения в поле зрения.

7. Вращая микровинт на 1-2 оборота, добиться четкого изображения.

8. После просмотра препарата макровинтом поднять тубус, снять препарат, протереть фильтровальной бумагой фронтальную линзу иммерсионного объектива, салфетку положить на предметный столик.

9. Перевести на малое увеличение и опустить тубус до упора.

ЗАНЯТИЕ №2

ТЕМА: Морфология и структура прокариотов. Сложные методы окраски.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1.Освоить теоретический материал по теме занятия.

2. Знать сущность и назначение сложных методов окраски: по Граму, по Бурри-Гинсу, по Ожешко, по Циль-Нильсену.

3. Иметь представление о принципе люминесцентной и фазовоконтрастной микроскопии.

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1. Структура бактериальной клетки: обязательные и необязательные компоненты.

2. Методы для изучения морфологии бактерий, их значение.

3. Оболочка бактерий, ее строение. Цитоплазматическая мембрана, ее роль.

4. Строение клеточной стенки у Гр+ и Гр-бактерий. Принцип и сущность окраски по Граму. Протопласт, сферопласт, L-формы бактерий.

5. Капсула бактерий, роль. Методы выявления капсул.

6. Споры, условия и механизм образования, значение спорообразования, методы обнаружения спор.

7. Жгутики, строение, роль. Методы изучения подвижности. Пили, их значение.

8. Цитоплазма и ее структуры, их назначение. Методы для обнаружения зерен волютина.

9. Нуклеоид, роль, методы обнаружения.

ЛИТЕРАТУРА:

1. Лекционный материал.

2. Учебник «Медицинская микробиология» под редакцией проф. Д.К. Новикова, проф. И.И. Генералова, 2002, стр. 23-30.

3. «Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии» Н.П. Елинов, стр. 30-35, 18-19.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

1. Приготовление мазков из смеси сарцины и кишечной палочки, окраска по Граму в модификации Синева.

2. Микроскопия демонстрационных мазков с капсульными бактериями, окраска по Бурри-Гинсу.

3. Микроскопия демонстрационных мазков со спорами, окраска по Ожешко.

4. Микроскопия демонстрационных мазков с зернами волютина в дрожжах, окраска по Нейссеру.

5. Зарисовка четырех препаратов.

ПРЕПАРАТ №1 ПРЕПАРАТ №2

Смесь E.coli и Sarcina flava Капсула у бактерий

Окраска по Граму Окраска по Бурри-Гинсу

ПРЕПАРАТ №3 ПРЕПАРАТ №4

Зерна волютина в дрожжах Споры Вас.anthracoides

Окраска по Нейссеру Окраска по Ожешко

Сложные методы окраски:

I. Окраска по Граму:

1. На фиксированный мазок накладывают фильтровальную бумагу, пропитанную карболово-спиртовым раствором генцианового фиолетового и сверху капают несколько капель дистиллированной воды на 1-2 мин.

2. Убирают фильтровальную бумагу и, не промывая водой, наносят раствор Люголя на 1-2 мин.

3. Сливают раствор Люголя и обесцвечивают спиртом – 30 секунд.

4. Тщательно промывают водой.

5. Докрашивают водным раствором фуксина 1-2 мин., промывают, высушивают фильтровальной бумагой, микроскопируют.

Результат: Гр(+) бактерии окрашиваются в сине-фиолетовый цвет, Гр(-) бактерии – в розовый.

II. Окраска по Бурри-Гинсу:

1. Каплю взвеси микробов смешивают с каплей туши на обезжиренном стекле и готовят мазок шлифованным краем стекла, как мазки крови, высушивают, фиксируют.

2. Наносят водный раствор фуксина на 1-2 мин.

3. Промывают, высушивают, микроскопируют.

Результат: на темном фоне туши видны неокрашенные светлые капсула, внутри которой – красные бактерии.

III. Окраска по Ожешко:

1. На нефиксированный мазок наносят 0,5% раствор хлористоводородной кислоты и подогревают на пламени горелки в течение 2-3 мин.

2. Кислоту сливают, промывают мазок, просушивают, фиксируют в пламени горелки.

3. Через фильтровальную бумагу наносят карболовый фуксин Циля, подогревают над пламенем горелки до трехкратного появления паров.

4. Снимают бумагу, промывают водой.

5. Обесцвечивают мазок 5% раствором серной кислоты 1-2 мин.

6. Промывают водой.

7. Докрашивают метиленовым синим 3-5 мин.

8. Промывают, микроскопируют.

Результат: споры окрашиваются в красный цвет, вегетативные клетки – в синий.

IV. Окраска по Нейссеру:

1. На фиксированный мазок наносят ацетат синьки Нейссера на 2-3 мин.

2. Наносят раствор Люголя на 10-30 секунд.

3. Промывают водой.

4. Докрашивают раствором везувина или хризоидина 0,5-1 мин.

5. Промывают, высушивают, микроскопируют.

Результат: зерна волютина окрашиваются в темно-синий цвет, цитоплазма бактерий – в желто-коричневый (метахромазия).

ЗАНЯТИЕ №3

ТЕМА: Морфология и структура прокариотов (спирохеты, риккетсии, хламидии, микоплазмы). Эукариоты (грибы и простейшие). Выделение чистой культуры аэробных бактерий (1 день исследования).

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1. Знать теоретический материал по теме занятия.

2. Продолжить знакомство с морфологией и структурой микроорганизмов .

3. Знать отличия прокариотов и эукариотов.

4. Овладеть техникой посева петлей на чашку с мясопептонным агаром для получения роста отдельных изолированных колоний.

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1. Извитые формы бактерий. Спирохеты, строение, классификация, методы изучения их морфологии.

2. Риккетсии: морфология, структура, особенности физиологии.

3. Хламидии: морфология, структура, циклы развития.

4. Микоплазмы: морфология, особенности строения.

5. Грибы, морфология, строение, классификация.

6. Простейшие, строение, классификация.

ЛИТЕРАТУРА:

1. Лекционный материал.

2. Учебник «Медицинская микробиология» под редакцией проф. Д.К. Новикова, проф. И.И. Генералова, 2002, стр. 32-38.

3. «Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии» Н.П. Елинов, с.22-29.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

1. Изучение и зарисовка демонстрационных препаратов (спирохеты, хламидии, кандиды, плесени, простейшие).

ПРЕПАРАТ №1

<== предыдущая страница	\|	следующая страница ==>
	\|	Chlamidia trachomatis

Дата добавления: 2014-09-08; просмотров: 1554; Нарушение авторских прав

Мы поможем в написании ваших работ!

lektsiopedia.org - Лекциопедия - 2013 год. | Страница сгенерирована за: 0.006 сек.