Количественное определение активности амилазы мочи (диастазы)

Нормальная активность диастазы в моче здоровых людей невелика – от 4 до 64 ед. (за единицу принимают то ее кол-во, которое за 30 мин при 38^о С полностью расщепляет 1 мл 0,1%-ного раствора крахмала).

При некротических процессах или воспалительных заболеваниях поджелудочной железы, при воспалении околоушной железы увеличивается активность диастазы в крови, и, как следствие, в моче. Это наблюдение является вспомогательным диагностическим признаком.

Ход работы: В десять пронумерованных пробирок внести по 1 мл 0,14 н раствора хлорида натрия. В первую пробирку внести 1 мл исследуемой мочи, смешать и затем перенести 1 мл смеси во вторую пробирку, смешать, перенести 1 мл в третью и т.д. Из последней (десятой) пробирки 1 мл смеси вылить. Во все пробирки внести по 2 мл 0,1 %-ого раствора крахмала и по 1 мл 0,14 н раствора хлорида натрия, смешать, поместить в термостат (45^о) на 15 мин.

Одновременно и быстро охладить все пробирки, поместив их в холодную воду и добавить в каждую по одной капле раствора Люголя. Жидкость окрашивается в желтоватый цвет йодом, в различные оттенки розового (декстрины) и фиолетового (декстрины с большим размером молекул), а также в синий цвет (крахмал).

Учет результата: Рассчитать количество мочи в последней (слева направо) пробирке, сохранившей желтую окраску ( полное расщепление крахмала).

Допустим, это пробирка №4, моча в которой разведена в 16 раз по сравнению с пробиркой 1, где было 0,5 мл мочи. Следовательно, в пробирке 4-й мочи содержится 0,03125 мл (0,5/16). Это количество мочи вызвало расщепление 2 мл 0,1%-ого раствора крахмала, а 1 мл мочи способен расщепить Х мл.

Составляем уравнение и рассчитываем значение величины Х:

2 х 1

Х=------------- = 64 мл 0,1% -ого раствора крахмала

0,03125

Следовательно, активность амилазы мочи равна 64 ед. на 1 мл мочи

Задание: определить активность диастазы в предложенной пробе мочи и сопоставить с нормальными значениями.

Выполнить следующее:

1. Предположите, какие из ферментов на схеме образования вещества Р из вещества А может быть регуляторным?

фермент1 фермент.2 фермент.3

А ® В « С « Р

2. Препарат аллопуринол, используемый при лечении падагры, является структурным аналогом гипоксантина – субстрата фермента ксантиноксидазы. Назовите механизм действия аллопуринола в реакции образования мочевой кислоты.

3. Наследственные энзимопатии связаны с такими изменениями первичной структуры ферментов, при которых может произойти:

А. Нарушение комплементарности активного центра к субстрату.

Б. Изменение структуры аллостерического центра.

В. Изменгение ферментативной активности.

Г. Изменению концентрации веществ в клетке.

Д. Образование токсичных веществ.

4. Представьте на обсуждение резюме по теме «Ферменты», с соответствующей иллюстрацией.

Дата добавления: 2014-10-14; просмотров: 481; Нарушение авторских прав

Мы поможем в написании ваших работ!