Главная страница Случайная лекция Мы поможем в написании ваших работ! Порталы: БиологияВойнаГеографияИнформатикаИскусствоИсторияКультураЛингвистикаМатематикаМедицинаОхрана трудаПолитикаПравоПсихологияРелигияТехникаФизикаФилософияЭкономика Мы поможем в написании ваших работ! |
Производства живой сухой вакцины против рожи свинейСовременная промышленная технологическая линия ВАКЦИН И ДИАГНОСТИКУМОВ Тема 7. ПРОИЗВОДСТВО ПРОТИВОБАКТЕРИАЛЬНЫХ из штамма ВР-2(ОАО Омский биокомбинат, Ставропольская биофабрика). Промышленная технология производства представлена на примере живой сухой вакцины из штамма ВР-2 против рожи свиней. При культивировании штамма ВР-2 в биореакторе его биологические свойства не изменяются и соответствуют требованиям инструкции или регламента. Термическая стерилизация питательной среды (125 °С) удлиняет время культивирования и уменьшает концентрацию микробных тел возбудителя рожи свиней. В процессе хранения каждой серии жидких вакцин из штамма ВР-2 значительная часть микробных клеток отмирает. Лиофилизированные вакцины более стандартны, так как имеют в прививной дозе определенное количество микробных тел. Известно, что препараты с мелкими частицами сорбента более иммуногенны, чем препараты с крупными частицами (хлопьями). Уплотнение частиц приводит к тому, что антиген, связанный с сорбентом, не усваивается организмом и не обеспечивает создание длительного и напряженного иммунитета. Современная промышленная технология производства вакцины из штамма ВР-2 учитывает недостатки ранее существующей технологии по составу питательной среды и методу их стерилизации, среде высушивания режимов культивирования и концентрирования. Штамм. Эталонный сухой стандартный заражающий Erysipelothrix rhusiopathiae вакцинный штамм ВР-2 возбудителя рожи свиней получают в высушенном виде в ампулах из ВГНКИ. Питательная среда. Культивирование штамма Erysipelothrix rhusiopa-thiae ВР-2 при производстве вакцины против рожи свиней осуществляется на питательной среде на основе перевара Хоттингера и печеночного экстракта с содержанием следующих компонентов: пептон; сухой дрожжевой экстракт; NaCl; KH2 PO4; Твин-80; глюкоза; нормальная сыворотка крупного рогатого скота; L-аргинин. Среда высушивания. При изготовлении живой сухой вакцины против рожи свиней из Erysipelothrix rhusiopathiae ВР-2 при сублимационной сушке используется среда высушивания на основе фосфатно-буферного раствора с содержанием следующих компонентов: желатин, пептон, сахароза. Блок-схема технологической линии производства вакцины против рожи свиней приведена на рис. 5.
логии производства вак-
(И.В. Тихонов, 2005)
Для промышленного культивирования используют вакцинный штамм ВР-2 (1). Культивирование матровой расплодки осуществляется на мясо-пептонном бульоне (2) в 100 мл флаконах (по 2 флакона на 1 ампулу (3), затем пересевают в 100 мл флаконы с полужидким МПБ. Культуру посевной серии пересевают в 3-х л бутыли (4). Посевную культуру (4) засевают в простерилизованный биореактор (6), в который предварительно подают питательную среду на основе перевара Хоттингера (11): перевар Хоттингера - 25 - 30%; печеночный экстракт - 5%; пептон - 5%; сухой дрожжевой экстракт 0,5%; NaCl - 0,2%; KH2 PO4 - 0,3%; Na2HPO4 - 1,8%; Твин-80 -0,05%; глюкоза - 0,2%; нормальная сыворотка крупного рогатого скота - 2%; L-аргинин - 0,05%; дистиллированная вода до 100%. Концентрация пептона в предлагаемой среде составляет 5%, что позволяет обеспечить бактерии рожи источником азота, который необходим для синтеза белковых соединений и формирования протоплазмы. В состав среды в качестве источника углерода вводится глюкоза, которая при расщеплении в форме АТФ используется микроорганизмами как источник энергии. Кроме того, для улучшения ростовых свойств питательной среды добавляется аминокислота L-аргинин и нормальная сыворотка крупного рогатого скота (КРС). Для сохранения ростовых свойств питательной среды используется метод холодной стерилизующей фильтрации с применением патронного микрофильтра (5) типа КФО-1 («Карлсон Форд», Англия) с фильтрующим материалом, состоящим из композита целлюлозы с минеральными волокнами. В биореактор (6) загружают питательную среду из расчета 2/3 рабочего объема биореактора, а засевная доза составляет 3 - 5% к объему питательной среды. Глубинное культивирование проводят при температуре (36 ± 0,5) в течение 20 - 22 ч при постоянном перемешивании (100 - 150 об/мин), что обеспечивает поддержание парциального давления растворенного кислорода (рО2) на уровне 40 - 50 % от насыщения. После окончания культивирования в отдельно взятой пробе из биореактора определяют оптическую концентрацию культуры, которая должна находиться в пределах (7 ± 2) млрд/мл. Затем в биореактор с культуральной жидкостью добавляют среду высушивания из расчета 1:4 на основе фосфатно-буферного раствора (7). Для повышения качества и сроков хранения сублимационно высушенной противорожистой вакцины концентрация пептона, как одного из наиболее термозащищающих веществ, доводится до 15%. Концентрация желатина, обладающая меньшими защитными свойствами, с целью снижения количества, балластных веществ уменьшена до 4 %. Для повышения стабильности вакцины при высушивании и хранении концентрация сахарозы увеличена до 20%. Применение предложенной среды высушивания позволяет повысить выживаемость культуры бактерий рожи при сушке до 70 - 75% и увеличить сроки хранения с 6 месяцев до 1 года. Среду высушивания перемешивают с культуральной жидкостью при 200 - 300 об/мин в течение 15 мин. После этого бактериальную суспензию перекачивают в емкость для расфасовки, выдерживают при температуре (6 ± 2) °С в течение 1-3 сут, до получения предварительных результатов исследований на чистоту культуры (8). После этого ее передают на фасовку в 20 мл флаконы (9), а затем - на лиофилизацию (10). Аппаратурно-технологическая схема линии производства живой сухой вакцины против рожи свиней из штамма ВР-2 приведена на рис. 10.2. Контроль вакцины. Вакцина против рожи свиней из штамма ВР-2 живая сухая должна соответствовать требованиям технических условий и изготовляться согласно «Инструкции по изготовлению и контролю вакцины против рожи свиней из штамма ВР-2 живой сухой». По физико-химическим и биологическим свойствам вакцина должна соответствовать требованиям и нормам. Упаковка и маркировка. Бактериальную культуру вакцинного штамма ВР-2 после контроля типичности и чистоты роста, соединенную в соотношении 1:1 - 1:4 со средой высушивания, расфасовывают по 10 см3 ± 3% в чистые стерильные флаконы вместимостью 20 мл, установленные в кассеты, предварительно укупоривают пробками УJI-1, подвергают замораживанию и лиофилизации. Показатели качества вакцины приведены в табл. 11 Таблица 11. Показатели качества вакцины (И.В. Тихонов, 2005)
Окончательное укупоривание флаконов осуществляется с помощью прижимной плиты в атмосфере азота. После этого флаконы с вакциной закатывают колпачками. На флаконы с вакциной должны быть наклеены этикетки с указанием наименования предприятия-изготовителя, наименования препарата, номера серии и контроля, дозы препарата, даты изготовления, срока годности. Статистические показатели промышленного производства сухой живой вакцины против рожи свиней из штамма ВР-2 по 30 сериям приведены в табл.12. Широкое распространение возбудителя в природе является одной из существенных сторон его биологии, что обусловливает возникновение заболевания почти повсеместно в виде спорадических случаев и эпизоотических вспышек, представляя в отдельных хозяйствах серьезную проблему.
Дата добавления: 2014-03-03; просмотров: 781; Нарушение авторских прав Мы поможем в написании ваших работ! |