Главная страница Случайная лекция Мы поможем в написании ваших работ! Порталы: БиологияВойнаГеографияИнформатикаИскусствоИсторияКультураЛингвистикаМатематикаМедицинаОхрана трудаПолитикаПравоПсихологияРелигияТехникаФизикаФилософияЭкономика Мы поможем в написании ваших работ! |
Приготовление аллергеновТуберкулин. Впервые туберкулин был получен и применен в ветеринарной практике в России в 1988 г. Гельманом Х.И., затем для медицинских целей изготовлен Р.Кохом в 1890 г. Для диагностики туберкулеза отечественная биопромышленность выпускает несколько видов аллергенов: сухой очищенный ППД-туберкулин (Purified Protein Derative) - для млекопитающих, сухой очищенный ППД-туберкулин для птиц, альттуберкулин (АТК), КАМ-туберкулин, стандартный раствор ППД-туберкулина для млекопитающих. Для приготовления ППД-туберкулина и альттуберкулина для диагностики туберкулеза млекопитающих используют производственные штаммы возбудителя туберкулеза бычьего вида. 1. Производственные штаммы возбудителя туберкулеза бычьего вида выращивают в модифицированной среде Соттона с аспарагином и лимонной кислотой в течение 2 месяцев. 2. Автоклавируют взвесь микобактерий. 3. Белок культуральной жидкости осаждают трихлоруксусной кислотой. 4. Центрифугируют и повторно осаждают белок сернокислым аммонием. 5. Надосадочную жидкость удаляют, а преципитат растворяют в воде и подвергают диализу для удаления остатков сернокислого аммония. 6. Раствор туберкулина подщелачивают и фильтруют. 7. Расфасовывают во флаконы объемом 10 - 20 мл и лиофильно высушивают. 8. Проводят контроль туберкулинов на растворимость, стерильность, рН, безвредность, специфичность и содержание туберкулиновых единиц (ТЕ). Активность выпускаемых серий ППД должна составлять 50000 ТЕ/мл. Туберкулин представляет собой лиофильно высушенные белковые продукты метаболизма микобактерии и белки, извлеченные из клеток. Комплексный аллерген из атипичных микобактерии (КАМ) готовят по типу ППД-туберкулинов для млекопитающих и птиц. В качестве производственных штаммов используют наиболее часто мигрирующие на животноводческих фермах нефотохромогенные и скотохрамогенные микобактерии (штаммы Мус. Serofulaccum-12 и Мус. intracellulare-13). Культуры этих штаммов поддерживают па картофельной среде Павловского и для изготовления аллергена адаптируют к синтетической питательной среде. Из 2-месячных культур готовят растворы моноаллергенов. Затем растворы моноаллергенов смешивают в разных количествах по содержанию ЕД и лиофилизируют. Комплексный аллерген выпускают во флаконах вместимостью 10 мл с содержанием 67500 ЕД. Бруцеллин. Для приготовления бруцеллина используют производственный штамм Вг. abortus В-1. 1. Производственный штамм В. abortus B-1 в S-форме и не вызывающий образования агглютининов при подкожном введении морским свинкам выращивают в биореакторе в питательной среде с 0,5%глюкозы при 37 °С в течение 4-5 сут. 2. Культуру бруцелл прогревают до 105 - 110°С при работающей мешалке, затем охлаждают и центрифугируют. 3. Надосадочную жидкость (конденсат бруцеллина) фильтруют через стерилизующие пластины и собирают в стерильную емкость. 4. Бактерийную массу разбавляют физраствором 1:50 и стерилизуют при 105-110°С. 5. Надосадочную жидкость (экстракт бруцеллина) после стерилизующей фильтрации смешивают с ранее полученным концентратом, смесь разводят стерильным физраствором до необходимой концентрации бактериального белка, доводят рН до 7,2 -7,4. 6. Приготовленную серию бруцеллина разливают во флаконы, закрывают пробками, обкатывают алюминиевыми колпачками. 7. Флаконы стерилизуют в автоклаве при 105-110°С и выдерживают 3 сут в термостате при 37 °С. Конечный продукт - бруцеллин представляет собой стерильную, прозрачную жидкость светло-коричневого цвета, содержащую продукты жизнедеятельности (метаболизма) бруцелл и специфические вещества белковой природы, извлеченные из них. Готовый препарат подвергают контролю на стерильность, содержание бактериального белка, концентрацию водородных ионов, безвредность, специфичность и активность. Маллеин. Для изготовления маллеина используют штамм № 5584 возбудителя сапа. 1. Actinobacillus mallei № 5584 выращивают в мясо-пептонном глицериновом бульоне (МПГБ) в бутылях в течение 4 месяцев при 37°С. 2. Культуральную суспензию автоклавируют и отстаивают в течение 4 мес. при 20 °С. 3. Надосадочную жидкость фильтруют через стерилизующие пластины. 4. Разливают в ампулы или флаконы, которые после закупорки стерилизуют автоклавированием. 5. Готовый препарат контролируют на стерильность, безвредность и специфичность. Вышеизложенная технология получения бруцеллина, туберкулина, маллеина показывает, что несмотря на ряд технологических различий в их изготовлении, имеются и некоторые общие процессы. Эти препараты представляют собой культуральные жидкости, содержащие продукты метаболизма, автолизаты и экстракты возбудителей соответствующих заболеваний, подвергнутые автоклавированию. Применение таких диагностических препаратов позволяет эффективно проводить противоэпизоотические мероприятия по ликвидации в стране бруцеллеза, туберкулеза, недопущению заболевания сапом животных и людей.
Дата добавления: 2014-03-03; просмотров: 1061; Нарушение авторских прав Мы поможем в написании ваших работ! |